DNA氧化損傷與食管慢性炎癥及增生病變的關系研究.pdf

1、背景和目的：
　　食管癌(esophagealcarcinoma，EC)是世界上十大常見惡性腫瘤之一，潮汕地區(qū)尤其是南澳島是食管癌高發(fā)地區(qū)。課題組前期研究發(fā)現食管癌變過程常伴隨大量的慢性炎癥，提示慢性炎癥與食管癌的發(fā)生關系密切。慢性炎癥產生大量的活性氧和活性氮(reactive oxygen and nitrogen species，RONS)可使DNA發(fā)生氧化損傷。DNA氧化損傷的累積可能導致機體正常細胞基因突變并向惡性轉化。8

2、-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy-2’-deoxy-guanosine,8-OHdG)是DNA氧化損傷反應中最主要的產物，同時也是公認的檢測DNA氧化損傷的生物學標記。亦有研究表明，在腫瘤細胞中NF-κB信號通路可以被ROS及其產物激活。
　　本研究通過檢測8-OHdG在食管非癌組織中的表達，探討DNA氧化損傷與食管慢性炎癥、癌前病變的關系；用不同濃度的H2O2在體外刺激三株食管永生化上皮細胞(NE2、NE3、NE6)16 h后

3、檢測8-OHdG的表達，探討在體外活性氧對食管永生化上皮細胞的影響；通過用800μM H2O2及10ng/ml humanTNF-α分別在體外用不同時間刺激NE細胞后檢測NF-κB(p65)的表達，功能上探討H2O2誘導食管永生化上皮細胞DNA氧化損傷的潛在機制。
　　材料與方法：
　　材料：
　　90例內鏡活檢食管非癌組織石蠟標本，收集自汕頭大學醫(yī)學院病理科。
　　19例尸檢食管組織石蠟標本，收集自汕頭大學司法

4、鑒定中心。
　　3株食管永生化上皮細胞系(NE2、NE3、NE6)，由香港大學曹世華教授惠贈。
　　方法：
　　1、HE染色：觀察食管非癌標本的上皮增生類型，炎癥細胞浸潤程度情況。
　　2、免疫組化：采用Envision兩步法檢測8-OHdG在食管非癌標本的表達。
　　3、細胞培養(yǎng)：利用H2O2、hTNF-α處理食管永生化上皮細胞。
　　4、免疫熒光：檢測食管永生化上皮細胞在H2O2處理前后8-OHd

5、G的表達；H2O2、hTNF-α處理前后NF-κB(p65)的表達。
　　5、利用MTT檢測H2O2處理食管永生化上皮細胞的細胞活性。
　　6、圖像采集：使用Leica DM2500及OLYMPUS BX43顯微鏡和IM50及cellSens Entry圖像采集系統對染色結果進行拍照分析。
　　7、統計分析：利用SPSS19.0對實驗數據進行統計分析，采用了等級相關分析、單因素方差分析等方法。論文圖運用GraphPad

6、 Prism5制作。
　　研究結果：
　　1、炎癥等級與食管粘膜上皮增生之間存在正相關(P<0.01)，Spearman相關系數rs=0.371。
　　2、隨著炎癥程度增加，8-OHdG的表達逐漸增強(P<0.05)。
　　3、食管黏膜從正常到增生的過程，8-OHdG的胞核表達逐漸增強(P<0.01)，且其表達與食管上皮增生等級成正相關，rs=0.486。
　　4、3株食管永生化上皮細胞活性隨著H2O2處理

7、濃度增加而降低。
　　5、400μM雙氧水處理食管永生化上皮細胞16h，8-OHdG開始出現胞核表達。
　　6、800μM雙氧水處理NE2細胞8h，NF-κB(p65)開始出現胞核表達。
　　7、10ng/mlhTNF-α處理NE2細胞10min，NF-κB(p65)開始出現胞核表達。
　　研究結論：
　　1、炎癥越重，DNA氧化損傷越重，食管上皮增生級別越高。
　　2、H2O2可誘導食管永生化上皮細