免疫營(yíng)養(yǎng)素DHA協(xié)同5-FU抑制胃癌的基礎(chǔ)研究與腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)治療改善胃癌術(shù)后預(yù)后的臨床研究.pdf

1、第一部分
　　 二十二碳六烯酸(DHA)，研究證實(shí)不僅具有供能改善營(yíng)養(yǎng)狀況的特性而且在體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí)具有抑制多種實(shí)體腫瘤細(xì)胞增殖生長(zhǎng)的抗腫瘤特性，但是仍有部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果與此不同。另外在我們前期研究中發(fā)現(xiàn)ω-3Pufas的二十碳五烯酸(EPA)能增效表阿霉素對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制作用，但是機(jī)制尚不清楚，故本研究擬在此基礎(chǔ)上從細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩個(gè)水平進(jìn)一步探討DHA聯(lián)合氟尿嘧啶(FU)對(duì)胃癌的作用和相關(guān)機(jī)制。
　　 [研究目的]研

2、究DHA與FU在體外和體內(nèi)兩個(gè)水平對(duì)胃癌細(xì)胞和人胃癌裸鼠移植瘤的影響，二者的聯(lián)合抗癌效率，探討DHA和FU聯(lián)合抗癌的相關(guān)機(jī)制。為胃癌綜合治療提供新思路。
　　 [研究方法]
　　 1.體外實(shí)驗(yàn):首先采用MTT法檢測(cè)兩種抗癌介質(zhì)對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901和MGC803的抑制作用，DHA對(duì)正常細(xì)胞株人胚肺成纖維細(xì)胞的影響，根據(jù)Chou-Talaly中效原理計(jì)算兩抗癌介質(zhì)的中效濃度以及判定聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的相互作用關(guān)系；其次使用DHA

3、和FU兩種介質(zhì)單用或聯(lián)用干預(yù)胃癌細(xì)胞24h后依次進(jìn)行:①Transwell小室檢測(cè)胃癌細(xì)胞體外侵襲能力的改變，②流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期變化，③硫代巴比妥酸法(TBARS)檢測(cè)細(xì)胞膜發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)(LPO)生成終產(chǎn)物丙二醛(MDA)的水平，④熒光探針DCF檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧族(Ros)水平，⑤AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，⑥WesternBlot法檢測(cè)藥物作用相應(yīng)靶蛋白表達(dá)變化情況。
　　 2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn):

4、富含DHA的魚油脂肪乳劑Omegaven和FU單用和聯(lián)合干預(yù)人胃癌裸鼠移植瘤模型21天，觀察裸鼠一般生長(zhǎng)狀況、體重變化、腫瘤體積和重量變化、移植瘤病理改變以及WesternBlot檢測(cè)移植瘤凋亡蛋白表達(dá)變化。
　　 [結(jié)果]
　　 體外實(shí)驗(yàn):
　　 1.低濃度DHA對(duì)HPF增殖無(wú)抑制作用，2.低濃度DHA對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901和MGC803增殖有抑制作用，隨作用劑量增加、作用時(shí)間延長(zhǎng)而增強(qiáng)，呈劑量-時(shí)間依賴效應(yīng)

5、，3.低濃度DHA聯(lián)合FU有很強(qiáng)的增殖抑制作用，兩介質(zhì)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的中效濃度均比單用時(shí)顯著降低，二者聯(lián)用在抑制作用達(dá)30％時(shí)合用指數(shù)CI<1，二者增殖抑制作用存在協(xié)同關(guān)系，4.DHA和FU合用顯著抑制SGC7901的體外侵襲能力，減少Transwell小室模型中穿膜細(xì)胞數(shù)，5.兩者合用共同抑制胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)停滯于G0/G1期，6.DHA能誘發(fā)SGC7901發(fā)生LPO，F(xiàn)U幾乎無(wú)此作用，兩者聯(lián)用未見(jiàn)LPO反應(yīng)產(chǎn)物MDA水平升高，與DHA單用比

6、較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05，40μg/mlVitC對(duì)SGC7901無(wú)增殖或抑制作用，預(yù)先用VitC干預(yù)16h后，DHA誘發(fā)LPO作用被削弱，MTT檢測(cè)DHA與FU聯(lián)用時(shí)對(duì)SGC7901增殖的抑制作用也被廢除，7.本研究所用的兩種濃度的DHA(30、60μg/ml)能誘發(fā)較高水平的細(xì)胞內(nèi)Ros，顯著強(qiáng)于FU(12.5、25μg/ml)，兩者聯(lián)用產(chǎn)生的Ros水平顯著高于二者單用，P<0.05，8.FU、DHA單用誘發(fā)SGC7901凋

7、亡作用不顯著，兩者合用時(shí)，凋亡率顯著升高，P<0.05，9.WesternBlot結(jié)果顯示:FU上調(diào)bcl-2，對(duì)caspase-3表達(dá)無(wú)促進(jìn)作用，DHA逆轉(zhuǎn)FU的作用，并促進(jìn)caspase-3表達(dá)，下調(diào)Cox2表達(dá)，兩者合用時(shí)bcl-2、cox2、MnSOD表達(dá)下調(diào)，剪切型caspase-3上調(diào)；
　　 體內(nèi)實(shí)驗(yàn):
　　 1.與control組比較，Omegaven未見(jiàn)明顯促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，F(xiàn)U聯(lián)用Omegaven能顯著抑

8、制移植瘤生長(zhǎng)，2.應(yīng)用FU的小鼠體重丟失嚴(yán)重，加用Omegaven后有助于保護(hù)小鼠體重丟失，3.WesternBlot結(jié)果顯示:Omegaven和FU聯(lián)用較單用顯著降低bcl2表達(dá)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.體外環(huán)境中，DHA不會(huì)刺激胃癌細(xì)胞的增長(zhǎng)，在適宜濃度下能抑制胃癌腫瘤細(xì)胞而對(duì)正常細(xì)胞無(wú)抑制作用，從濃度標(biāo)準(zhǔn)分析，無(wú)法單獨(dú)等同于化療藥物:
　　 2.DHA與FU聯(lián)用在體外環(huán)境中可以協(xié)同抗癌，增效FU對(duì)胃癌細(xì)

9、胞的毒細(xì)胞作用，與FU單獨(dú)作用相比，添加低濃度DHA可以減少FU的用量而不削弱抑制作用的效果:
　　 3.DHA聯(lián)合FU協(xié)同抗癌的作用可能與兩者協(xié)同阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期，DHA誘發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，進(jìn)而二者協(xié)同形成大量活性氧族，引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境氧化應(yīng)激水平升高，細(xì)胞凋亡增多，分子層面的凋亡調(diào)控機(jī)制可能與DHA抑制或下調(diào)了FU引起的bcl-2表達(dá)增加，并促進(jìn)caspase-3表達(dá)增加有關(guān)，同時(shí)可能還包括DHA下調(diào)Cox2蛋白表達(dá)

10、水平，與FU共同下調(diào)MnSOD表達(dá)；
　　 4.富含ω-3Pufas(DHA、EPA)的Omegaven在裸鼠移植瘤模型中運(yùn)用不誘導(dǎo)移植瘤的增長(zhǎng)，聯(lián)合FU時(shí)能顯著抑制腫瘤的生長(zhǎng)，而且與單用FU比較，Omegaven能防止小鼠體重的嚴(yán)重丟失，作用機(jī)制可能與兩者聯(lián)用誘發(fā)調(diào)亡相關(guān)。
　　 第二部分
　　 根治性手術(shù)是胃癌病人首選治療手段，但是并非所有接受根治性手術(shù)的病人能夠術(shù)后長(zhǎng)期生存，故影響病人術(shù)后生存的因素眾多，北

11、京協(xié)和醫(yī)院每年診治胃癌病例較多，分析總結(jié)這些胃癌術(shù)后病人的生存情況以及腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)干預(yù)對(duì)術(shù)后近期的獲益可促進(jìn)今后治療水平的提高。
　　 [目的]
　　 1.分析在我院行胃癌手術(shù)的病人術(shù)后1、3、5年生存率以及影響術(shù)后長(zhǎng)期生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　 2.分析術(shù)后3-6月內(nèi)通過(guò)空腸造口管積極給予腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)支持的胃癌術(shù)后病人短期預(yù)后和收益。
　　 [方法]
　　 1.回顧性分析2002年12月至2003年12

12、月在我院行胃癌手術(shù)的120例病人資料，收集病例的一般情況、臨床病例資料、隨訪資料，EpiData3.0建立數(shù)據(jù)庫(kù)，數(shù)據(jù)采集完成導(dǎo)入SpSS進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 2.進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)干預(yù)分析時(shí)入選2002年12月至2007年12月間29例胃癌手術(shù)中同期行空腸造口管病例為帶管組，從進(jìn)行生存分析的120例病人中選擇32例未帶空腸造口管病人為對(duì)照組，比較兩組病例在體重、BMI、TLC、Hb、AIb、化療耐受、NRS2002評(píng)分、Karporfs

13、ky(KPS)評(píng)分等方面的差異。
　　 [結(jié)果]
　　 1.生存分析結(jié)果①全組120例胃癌手術(shù)病人Kaplan-Meier分析l、3、5年生存率89.7％、45.1％、28.9％。胃竇癌1、3、5年生存率分別為94.0％、65.9％、42.0％，胃底賁門部癌1、3、5年生存率分別為79.4％、32.4％、16.3％，胃體、全胃癌1、3、5年生存率為81.6％、28.2％、12.1％，P=0.000。臨床分期I+II、II

14、I、IV各期的1、3、5年生存率和中位生存時(shí)間分別為94.1％、82.0％、57.4％、68.0±0.000m(I+II期)，89.1％、45.5％、21.6％、33±6.092m(III期)，81.4％、12.6％、8.4％、21±1.906m(IV期)，P=0.000。
　　 ②LogRank檢驗(yàn)篩選出:年齡(P=0.043)、手術(shù)方式(P=0.000)、根治度(P=0.000)、手術(shù)失血(P=0.025)、輸血(P=0.0

15、00)、貧血(P=0.001)、腫瘤部位、大小、分化、LN轉(zhuǎn)移、腫瘤T和TNM分期(P=0.000)是影響病人長(zhǎng)期生存的獨(dú)立因素③Logistic回歸和Cox回歸分析顯示:腫瘤大小(Exp(β)/RR=1.598)、LN轉(zhuǎn)移(Exp(β)/RR=1.599)、臨床腫瘤分期(Exp(β)/RR=1.572)等腫瘤病理特征密切與胃癌術(shù)后長(zhǎng)期生存相關(guān)，而上述特征變量的等級(jí)越高，預(yù)后越差，死亡風(fēng)險(xiǎn)比例增加。
　　 2.腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)干預(yù)分析結(jié)

16、果①與圍手術(shù)期比較，術(shù)后3-6個(gè)月內(nèi)帶管組29例病人與未帶管組32例病人體重均有丟失。帶管組病例體重丟失7.09±3.3Kg，未帶管組平均丟失9.87±3.1Kg，帶管組比未帶管組體重丟失少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P=0.020；帶管組病例術(shù)前BMI與非帶管組無(wú)差異，兩組病例術(shù)后3-6個(gè)月時(shí)BMI均降低，P=0.000，帶管組BMI減少2.4±1.0kg/m2顯著小于未帶管組3.2±0.9kg/m2，P=0.041，同樣，兩組病例BMI術(shù)前

17、術(shù)后變化差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P=0.041，②與術(shù)前比較，帶管組病例手術(shù)后3-6月內(nèi)NRS2002評(píng)分≥3者減少，未帶管組增加，兩組間差異比較有顯著性，P=0.000，③與術(shù)前比較，帶管組病例手術(shù)后KPS增加的病例的比例超過(guò)未帶管組，差異有顯著性，P=0.003，④兩組病人在TLC、Hb、Alb、preAlb、化療副反應(yīng)方面未見(jiàn)明顯差異。
　　 [結(jié)論]
　　 1.本研究顯示北京協(xié)和醫(yī)院2003年施行胃癌手術(shù)的病例術(shù)后1、

18、3、5年總體生存率89.7％、45.1％、28.9％，其中胃竇癌預(yù)后較好，胃底賁門部癌預(yù)后最差2.年齡、手術(shù)方式、根治度、手術(shù)失血、輸血、貧血、腫瘤部位、大小、分化、LN轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、腫瘤分期均是影響病人長(zhǎng)期生存的獨(dú)立因素，Logistic和cox危險(xiǎn)因素回歸分析顯示腫瘤大小(RR=1.598)、LN轉(zhuǎn)移(RR=1.599)、腫瘤分期(RR=1.487)等腫瘤病理特征為影響胃癌術(shù)后長(zhǎng)期生存的獨(dú)立因素；；
　　 3.圍手術(shù)期以及