圍手術(shù)期檢測肝細(xì)胞癌患者外周血AFPmRNA和GPC3mRNA的臨床意義.pdf

1、目的： 手術(shù)切除、肝移植是目前治療原發(fā)性肝癌的主要手段，術(shù)后仍有約70％的患者存在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，原因是手術(shù)前即存在未檢出的微轉(zhuǎn)移灶，而微轉(zhuǎn)移灶的腫瘤細(xì)胞長期處于免疫抑制未被發(fā)現(xiàn)。因此，早期發(fā)現(xiàn)外周血的肝癌細(xì)胞不僅對(duì)判斷肝癌的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)具有重要價(jià)值，而且對(duì)指導(dǎo)臨床治療亦有重要意義。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，近年來，具有高敏感性RT-PC已經(jīng)被用于實(shí)體瘤微轉(zhuǎn)移的檢測。甲胎蛋白是肝細(xì)胞癌微轉(zhuǎn)移檢測常見的標(biāo)志物，但是其敏感性只有39％-64

2、％，特異性為76％-91％，而且正常肝細(xì)胞、肝炎和肝硬化等非肝細(xì)胞癌患者外周血中也可能檢出甲胎蛋白，故對(duì)于其在微轉(zhuǎn)移檢測中的意義存在爭議。另外，由于腫瘤細(xì)胞存在基因異質(zhì)性，原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶的基因表達(dá)可能不一致，因此單標(biāo)志物檢測肝細(xì)胞癌微轉(zhuǎn)移容易出現(xiàn)假陰性。GPC3是近年來發(fā)現(xiàn)的一種具有肝癌細(xì)胞特異性的基因，在肝癌組織中表達(dá)率顯著升高，在非癌組織及癌旁組織均不表達(dá)，在非肝癌組織基本無表達(dá)，是目前發(fā)現(xiàn)的在AFP陰性肝癌中表達(dá)率最高的基因。該特

3、性使其有可能成為一種新的理想的肝癌分子標(biāo)記物。鑒于以上肝細(xì)胞癌微轉(zhuǎn)移檢測中存在的問題，我們推測：采用AFP和GPC3多標(biāo)志物聯(lián)合檢測可能有助于提高微轉(zhuǎn)移檢測的敏感性和特異性。 本研究在圍手術(shù)期聯(lián)合檢測了肝細(xì)胞癌患者外周血中AFPmRNA和GPC3mRNA，以評(píng)價(jià)多標(biāo)志物聯(lián)合檢測肝細(xì)胞癌微轉(zhuǎn)移的可行性和早期發(fā)現(xiàn)肝癌患者的術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的價(jià)值。 方法： 研究對(duì)象分為四組病例及健康志愿者：A組：39例，組織學(xué)證實(shí)為肝細(xì)

4、胞癌；B組：19例，組織學(xué)證實(shí)為肝炎和肝硬化；C組：10例，組織學(xué)證實(shí)為肝血管瘤；D組：10例，組織學(xué)證實(shí)為轉(zhuǎn)移性肝癌；E組；19例，為健康志愿者。運(yùn)用巢式RT-PCR技術(shù)分別于術(shù)前、術(shù)后7天檢測各組外周血中AFPmRNA和GPC3mRNA的表達(dá)，并隨訪19例行肝癌根治性切除的患者3-10個(gè)月。 結(jié)果： 1.術(shù)前外周血微轉(zhuǎn)移檢測 39例肝癌患者術(shù)前外周血標(biāo)本中，AFPmRNA、GPC3mRNA的檢出率分別為53.

5、8％(21/39)、61.3％(24/39)。AFPmRNA及GPC3mRNA的檢出率和TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移臨床參數(shù)密切相關(guān)。另外，當(dāng)肝癌直徑大于5cm、多結(jié)節(jié)、伴門靜脈癌栓，AFPmRNA及GPC3mRNA的檢出率明顯提高。而血漿甲胎蛋白水平、肝癌分化程度等與AFPmRNA及GPC3mRNA的檢出率無顯著相關(guān)。對(duì)照組中，B組AFPmRNA的檢出一率為10.5％(2/19)而GPC3mRNA未檢出；其余C、D、E組均未檢出AFPmRNA

6、和GPC3mRNA。此外，76.9％(30/39)的患者至少表達(dá)一種標(biāo)志物，38.5％(15/39)的患者兩種標(biāo)志物均陽性。AFPmRNA和GPC3mRNA的檢出顯著相關(guān)(P＜0.05)，相關(guān)系數(shù)為0.214。 2.術(shù)后微轉(zhuǎn)移的檢測 在行根治性外科治療的19例肝癌患者中，7例(36.8％)術(shù)前檢出AFPmRNA，其中4例術(shù)后7天復(fù)查仍持續(xù)陽性(A1組)；3例患者術(shù)后7天檢測呈陰性(B1組)；其余12例患者術(shù)前和術(shù)后檢測均

7、呈陰性(C1組)。在術(shù)后最長10個(gè)月的隨訪期間，轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的病例是A1組2例(2/4)、B1組2例(2/3)、C1組5例(5/12)。術(shù)前外周血AFPmRNA的檢出和術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)無顯著相關(guān)性(P＞0.05)。 在行根治性外科治療的19例肝癌患者中，10例(52.6％)術(shù)前檢出GPC3mRNA，其中5例術(shù)后7天復(fù)查仍持續(xù)陽性(A2組)；5例患者術(shù)后7天檢測呈陰性(B2組)；其余9例圍手術(shù)期檢測均為陰性(C2組)。在術(shù)后最長10個(gè)月的

8、隨訪期間，轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的病例是A2組3例(3/5)、B2組2例(2/5)、C2組4例(4/9)。術(shù)前GPC3mRNA的檢出和術(shù)后的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)無顯著相關(guān)性(P＞0.05)。 在19例隨訪的肝細(xì)胞癌患者中，以術(shù)后7天檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，GPC3的檢出率為21.6％(6/19)；AFPmRNA的檢出率為26.3％(5/19)。3例患者AFPmRNA和GPC3mRNA雙陽性(Ⅰ組)；5例患者檢出一種標(biāo)志物(Ⅱ組)；11例患者兩種標(biāo)志物均未檢出(Ⅲ

9、組)。在Ⅰ組中，3例患者在術(shù)后6月內(nèi)全部復(fù)發(fā)；在Ⅱ組中，4例患者在術(shù)后6個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)(80％)；Ⅲ組中，2例患者在隨訪期間復(fù)發(fā)(18.2％)。Ⅰ、Ⅱ組的復(fù)發(fā)率與Ⅲ組有顯著差異(P=0.016/2)，表明術(shù)后外周血AFPmRNA和GPC3mRNA的檢出和術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)有顯著相關(guān)性(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.以AFPmRNA或GPC3mRNA為標(biāo)志物，通過巢式逆轉(zhuǎn)錄PCR來檢測原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者外周血微轉(zhuǎn)移是可行的。聯(lián)合檢測