肝癌患者中血及骨髓中AFPmRNA檢測的臨床意義.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文肝癌患者中血及骨髓中AFPmRNA檢測的臨床意義姓名：傅佩芬申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)(普外)指導(dǎo)教師：鄭樹森2000.3.1陋L b 觀察．了解外閽血、骨髓A F P m R N A 表返與l - I C C 復(fù)發(fā)址移‘¨況的關(guān)系。探叫A F P m R N A作為H C C 微轉(zhuǎn)移指標(biāo)的可能性，為術(shù)前評估的完薔：、術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的監(jiān)測、肘移} 血受佛n 0 逃拌捉f J t l ' J + 效

2、手段，為Ⅲ手術(shù)期化療及術(shù)后綜合治j ，捉小依= | I l ；。1 標(biāo)本收集／材料與方法外』州血標(biāo)本墩白外周靜脈。f J 十癌組3 l 例，目{ f 暇比州2 0 圳，肝血管瘤紕4 例，川轉(zhuǎn)移疳i 寶_ { 6 例，均經(jīng)病理切片或臨瞇血清學(xué)、影緣學(xué)撿^ 證實(shí)，| | 刖舭系統(tǒng)疾病心者3 0 例，作為止常對j ! 鑊。骨髓標(biāo)本取自髂后上棘，肝癌組1 9 例，叭攻系統(tǒng)疾病組1 5 例。標(biāo)本“} 為5 m l ，以1 ．2 ％2 2 水乙二胺

3、四乙酸二鈉( E D T A ) 抗，址。H e p 3 B _ l ¨= 癌細(xì)胞于M E N 培養(yǎng)液中行體外培養(yǎng)，伯細(xì)胞牛K 旺盛時，收集細(xì)胞制成lx 1 0 1 慫液，仃倍比稀釋，分別按1 0 j ，j 0 4 ，1 0 ‘，i o j ，1 0 。，1 0 ”慫浮j 。5 n 1 1 L I 二常人全I(xiàn) ?{ ；。2 實(shí)驗(yàn)方法川俯比稀釋的禽確+ H e p 3 B 細(xì)胞的全I(xiàn) 衄行實(shí)驗(yàn)力；』、f 業(yè)! j ”} } 々洲

4、，以劬j _ ．“嫂敏感的N e s t e d 。I t l ．P C R 體系，然厲對收集的外閽血柑日‘髓標(biāo)小邊仃A F I } m R N A 檢測。實(shí)驗(yàn)步蜾：采J ·| 』密度梯皮離心法制備有核細(xì)胞后，以T R l z o l { 丁井硫：I L 陵J J 』[ ：一粉．氯仿一步抽捉有核f l l l 3 J f I總R N A ．逆轉(zhuǎn)錄合成A F P c D N A ，巢式P C R 擴(kuò)增A F Pj 。L ?，汀I

5、5 ％瓊脂糖凝膠電泳分“ i產(chǎn)：物，?性粥‘進(jìn)一步行P s t l 內(nèi)切6 9 酶切分析產(chǎn)物特芹{ f | = 。 統(tǒng)¨0 ’處I 里采川S A S 軟什也“i ；F [ , YL L 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，P < O 0 5 判定為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1 N e s t e d ．R T —P C R 檢測血液A F P m R N A 的敏感性俯【1 4 怖群的I q e p 3 B 細(xì)胞，經(jīng)N e s t e d —