TGF-β1對(duì)人心房成纖維細(xì)胞Smads蛋白和膠原表達(dá)影響及阿托伐他汀干預(yù)研究.pdf

1、目的：
　　 通過(guò)TGF-β1和阿托伐他汀對(duì)體外培養(yǎng)的人心房成纖維細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，觀(guān)察其Ⅰ型膠原，Smad2，Smad4和Smad7蛋白表達(dá)的變化，探討心房顫動(dòng)(房顫)患者心房纖維化的機(jī)制和阿托伐他汀抗纖維化機(jī)制。
　　 方法：
　　 通過(guò)對(duì)心臟外科手術(shù)獲得竇性心律患者右心耳組織約30mg，并分離培養(yǎng)心肌成纖維細(xì)胞，在倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)，生長(zhǎng)情況；免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定細(xì)胞；將細(xì)胞傳代培養(yǎng)后隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組

2、，應(yīng)用MTT法檢測(cè)TGF-β1和阿托伐他汀對(duì)心房心肌成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)增殖影響；應(yīng)用RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)TGF-β1和阿托伐他汀對(duì)心房心肌成纖維細(xì)胞中Smad2，Smad4，Smad7蛋白和Ⅰ型膠原表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：
　　 (1)、應(yīng)用組織塊培養(yǎng)法可成功地培養(yǎng)出人的心房心肌成纖維細(xì)胞，形態(tài)學(xué)觀(guān)察示，心房成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)比較緩慢，3-5天開(kāi)始從組織塊的周?chē)L(zhǎng)出，10-12天可長(zhǎng)到接合狀態(tài)，細(xì)胞呈

3、長(zhǎng)梭狀，排列緊密，有的交叉生長(zhǎng)，胞核較大，呈橢圓形或類(lèi)圓形，常含1～3個(gè)細(xì)胞核，胞漿透明，胞體較大，未見(jiàn)搏動(dòng)現(xiàn)象；免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀(guān)察到，心房心肌成纖維細(xì)胞Vimentin呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，第八因子呈陰性反應(yīng)；培養(yǎng)的心房心肌成纖維細(xì)胞純度在95％以上。(2)、MTT法檢測(cè)示：TGF-β1對(duì)心房心肌成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，在10ng/ml濃度時(shí)達(dá)到最大增殖作用；阿托伐他汀對(duì)心房心肌成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)具抑制作用，于10μ mol/L濃度時(shí)達(dá)到最

4、大抑制作用。(3)、與對(duì)照組相比，1ng/ml TGF-β1組，10ng/ml TGF-β1干預(yù)組使心房心肌成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯增高(P＜0.05)，同時(shí)Smad2，Smad4mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯增高(P＜0.05)，相反Smad7蛋白表達(dá)mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯減低(P＜0.05)；與10ng/ml TGF-β1組相比，10ng/ml TGF-β1和10μmol/L阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)組，10μmol/

5、L阿托伐他汀組使心房心肌成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯減低(P＜0.05)，同時(shí)Smad2，Smad4 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯減低(P＜0.05)，相反Smad7 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯增高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 (1)、組織塊培養(yǎng)法可成功培養(yǎng)人心房的心肌成纖維細(xì)胞；(2)、TGF-β1對(duì)體外培養(yǎng)的心房心肌成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，在10ng/ml達(dá)到最大效應(yīng)，阿托伐他汀對(duì)體外培