高鹽負(fù)荷加速誘導(dǎo)的自發(fā)性高血壓大鼠靶器官損傷時(shí)間窗研究.pdf

1、目的：高鹽攝入是高血壓及其發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)境因素之一，高鹽除直接升高血壓以外，還可獨(dú)立于血壓對(duì)心、腦、腎、大動(dòng)脈等高血壓靶器官產(chǎn)生有害作用。自發(fā)性高血壓大鼠（Spontaneously Hypertensive Rats，SHR）是研究原發(fā)性高血壓及其干預(yù)實(shí)驗(yàn)中最常用的動(dòng)物模型之一，然而據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，SHR在15～20周齡開(kāi)始出現(xiàn)左心室肥厚（Left Ventricular Hypertrophy，LVH），但只有在52至90周齡期間才會(huì)

2、出現(xiàn)明顯心臟功能障礙。故動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常采用高鹽負(fù)荷（給予高鹽飲食或高鹽飲水，以前者多見(jiàn)）的方法來(lái)加速SHR的靶器官損傷，但目前文獻(xiàn)中關(guān)于高鹽負(fù)荷干預(yù)SHR后出現(xiàn)明顯靶器官損傷的時(shí)間報(bào)道并不一致。本研究以SHR為研究對(duì)象，分別給予不同濃度鹽負(fù)荷飲食，動(dòng)態(tài)觀察SHR的心臟、腎臟及主動(dòng)脈等靶器官結(jié)構(gòu)和功能的變化，并與京都Wistar大鼠（Wistar Kyoto Rats，WKY）對(duì)照組進(jìn)行比較，以期確定SHR接受高鹽負(fù)荷后出現(xiàn)明顯靶器官損傷的

3、時(shí)間窗，為后續(xù)進(jìn)一步的的機(jī)制及干預(yù)研究提供參考依據(jù)。
　　 方法：以60只7周齡SHR為動(dòng)物模型，經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將SHR隨機(jī)分為三個(gè)亞組，分別給予含0.5％NaCl（低鹽組），4.0％NaCl（中鹽組）和8.0％NaCl（高鹽組）的飼料進(jìn)行不同濃度鹽負(fù)荷的干預(yù)，同時(shí)選取36只周齡、體重相當(dāng)?shù)腤KY大鼠作為對(duì)照組。從8周齡開(kāi)始，每?jī)芍芑蛩闹懿捎脴?biāo)準(zhǔn)尾部測(cè)壓法測(cè)定大鼠的無(wú)創(chuàng)血壓，每?jī)芍苁占鹘M大鼠的24小時(shí)尿液，利用ELISA

4、法測(cè)定24小時(shí)尿微量白蛋白水平，每四周采用二維超聲多普勒法，用12MHz超聲探頭經(jīng)胸部對(duì)各組大鼠心臟的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行動(dòng)態(tài)分析，持續(xù)12周后，將大鼠麻醉，首先采用雙導(dǎo)管法測(cè)定大鼠主動(dòng)脈脈搏波傳導(dǎo)速度（pulsewave velocity，PWV），隨后進(jìn)行取材，將心臟組織切片行苦味酸-天狼猩紅染色，利用偏振光顯微鏡和Pixera Pro150ES數(shù)字CCD采集圖像后，然后采用ImagePro Plus4.5軟件進(jìn)行分析，計(jì)算膠原容積分?jǐn)?shù)（

5、Collagen Volume Fraction，CVF）和血管周膠原面積/血管腔面積（Perivascular Collagen Area to Luminal Area ratio，PVCA/LA），用以反映心臟間質(zhì)和血管周纖維環(huán)程度，此外，利用麥胚凝集素（WGA，F(xiàn)ITC Conjugate）和4'，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）免疫熒光染色法計(jì)算心肌細(xì)胞橫斷面積（Myocardial Cross-Sectional Are

6、a，MCSA）。
　　 結(jié)果：
　　 1.除WKY的低鹽組外，其余五組大鼠血壓均隨周齡進(jìn)行性升高，以SHR的血壓升高尤為明顯，而高鹽組與中鹽組的血壓在各周齡相比均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 2.高鹽組和中鹽組的左心室結(jié)構(gòu)和功能均出現(xiàn)了明顯損傷，且高鹽組與中鹽組相比無(wú)顯著性差異，此外我們還發(fā)現(xiàn)，高鹽負(fù)荷后的8～12周可能是左心室由代償性肥厚進(jìn)展為失代償（即心室擴(kuò)張）的關(guān)鍵時(shí)間窗；另外心臟組織病理學(xué)結(jié)果顯示，高鹽組和中

7、鹽組SHR的心臟間質(zhì)和血管周圍膠原含量以及心肌細(xì)胞橫截面積明顯增加，提示心肌纖維化和心肌肥厚的形成，但是WKY的變化要小得多，高鹽組與中鹽組相比也無(wú)顯著性差異。
　　 3.我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，24小時(shí)尿微量白蛋白水平與鹽負(fù)荷濃度是相關(guān)的，與血壓水平無(wú)明顯關(guān)系。此外，各組SHR在8周齡時(shí)的24小時(shí)尿微量白蛋白水平明顯高于WKY，提示SHR在8周齡已經(jīng)存在輕度腎臟損傷。
　　 4.高鹽組和中鹽組SHR均出現(xiàn)了明顯的動(dòng)脈硬化，

8、但是WKY的變化不明顯，而且高鹽組和中鹽組相比無(wú)顯著性差異。
　　 結(jié)論：
　　 1.高鹽組和中鹽組的血壓、心臟結(jié)構(gòu)和功能以及動(dòng)脈硬化程度均無(wú)顯著性差異；
　　 2.高鹽負(fù)荷后的8～12周可能是左心室由代償性肥厚進(jìn)展為失代償（即心室擴(kuò)張）的關(guān)鍵時(shí)間窗；
　　 3.高鹽組和中鹽組SHR的心臟膠原含量以及動(dòng)脈硬化程度明顯增加，但WKY的變化較小；
　　 4.24小時(shí)尿微量白蛋白水平與鹽負(fù)荷的濃度直接相