TRIB3與糖尿病動脈粥樣硬化關(guān)系的實驗研究.pdf

1、
　　 糖尿病作為冠心病的等危癥已經(jīng)得到廣泛共識,然而糖尿病加速動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的具體機(jī)制目前仍然不詳,因而缺少以機(jī)制為基礎(chǔ)的靶向性治療。尋找糖尿病加速動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的具體機(jī)制并探索可能的有效治療方法成為目前國內(nèi)外研究的熱點。開展相應(yīng)研究的首要問題是建立適宜開展糖尿病動脈粥樣硬化研究的動物模型。目前,建立2型糖尿病動脈粥樣硬化動物模型的方法主要有兩種:一是通過敲除與代謝有關(guān)的基因聯(lián)合高脂飲食喂養(yǎng)誘發(fā)2型糖尿病；二是

2、通過長期高脂飲食喂養(yǎng)誘發(fā)2型糖尿病。然而,這些建立動物模型的方法仍然存在部分不足:(1)由于人類的2型糖尿病是多基因遺傳病,現(xiàn)有的基因敲除小鼠模型不能完全模擬人類的2型糖尿?。?2)代謝相關(guān)基因敲除小鼠模型不能排除代謝相關(guān)的基因敲除之后對動脈粥樣硬化的影響,且基因敲除為不可干預(yù)因素；(3)長期高脂飲食誘發(fā)的2型糖尿病動物模型的造模周期較長,且停用高脂飲食之后,血糖會逐漸恢復(fù)正常,不能有效區(qū)分年齡和糖尿病相關(guān)的動脈粥樣硬化；(4)單純高脂

3、飲食誘發(fā)的2型糖尿病動物模型,先有血脂代謝紊亂,而后逐漸出現(xiàn)血糖升高,這與人類糖尿病常有的糖脂代謝紊亂發(fā)病順序不完全一致。因此,本研究針對2型糖尿病動脈粥樣硬化動物模型的上述不足,采用ApoE-/-/LDLR-/-小鼠經(jīng)高脂高糖飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素誘發(fā)糖尿病,通過監(jiān)測體重、血壓、血糖、糖耐量試驗的動態(tài)變化,同時采用高分辨率顯微超聲技術(shù)監(jiān)測動脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展過程,探討建立2型糖尿病動脈粥樣硬化動物模型的可行性。
　　 目的

4、：
　　 1.探討高脂高糖飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素建立ApoE-/-/LDLR-/-小鼠2型糖尿病動物模型可行性；
　　 2.探討高脂高糖飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素建立2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠動脈粥樣硬化模型可行性；
　　 方法
　　 1.動物實驗:3周齡雄性ApoE-/-/LDLR-/-小鼠30只,行糖耐量試驗(IPGTT)后隨機(jī)分為普通飲食組(n=15)和糖尿病組(n=15),糖尿病

5、組飼以高脂飲食(20％脂肪,20％蔗糖,1.25％膽固醇)6周后,再次測IPGTT；出現(xiàn)胰島素抵抗的小鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)75mg/kg,2周后再次測IPGTT,隨機(jī)血糖≥11.1mmol/L時,可作為2型糖尿病成模的動物入組；
　　 2.IPGTT試驗:小鼠空腹10-16h,按照1.5g/kg體重腹腔注射葡萄糖,然后于0min、15 min、30 min、60 min和120 min分別斷尾取血檢測血糖；
　　

6、 3.ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重的監(jiān)測:定期監(jiān)測小鼠體重的變化；
　　 4.ApoE-/-/LDLR-/-小鼠血流動力學(xué)的評價:所有實驗動物在20周齡、22周齡和24周齡時通過小鼠尾動脈血壓測量儀監(jiān)測血壓和心率,每只動物測量3次,取其平均值；
　　 5.ApoE-/-/LDLR-/-小鼠動脈粥樣硬化斑塊的顯微超聲監(jiān)測:分別于相應(yīng)觀察時間點(14周齡、16周齡、18周齡、20周齡、22周齡和24周齡)進(jìn)行動脈

7、超聲檢查通過高分辨率顯微超聲技術(shù)監(jiān)測主動脈、頭臂干動脈和頸總動脈的動脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生和發(fā)展,測量內(nèi)膜中層厚度(IMT)；
　　 6.ApoE-/-/LDLR-/-小鼠血清糖代謝指標(biāo)的測定:實驗?zāi)?處死動物,分離血清,測定血糖、血清胰島素,計算胰島素抵抗指數(shù)。
　　 結(jié)果：
　　 1.ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重變化情況:3周齡時,兩組雄性ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=

8、0.213)；高脂飲食喂養(yǎng)6周后,糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重與普通飲食組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.010):注射鏈脲佐菌素后2周,糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與普通飲食組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.081)；繼續(xù)高脂飲食喂養(yǎng)至20周齡時,糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重明顯大于普通飲食組ApoE-/-/LDR-/-小鼠

9、體重,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0015)；隨后小鼠體重基本穩(wěn)定,至24周齡時,糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重仍然明顯大于普通飲食組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0073)。
　　 2.ApoE-/-/LDLR-/-小鼠血流動力學(xué)變化:與普通飲食組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠的心率未見明顯改變(P=0.309),然而隨著

10、小鼠周齡的增加,小鼠的心率逐漸降低(P=0.014)。與普通飲食組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠的收縮壓顯著升高(P=0.00004),小鼠周齡對收縮壓的影響沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.212),小鼠周齡與糖尿病在影響小鼠收縮壓方面沒有交互作用(P=0.390)；與普通飲食組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠的舒張壓顯著升高(P=0.0000

11、03),小鼠周齡對舒張壓的影響沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.137),小鼠周齡與糖尿病在影響小鼠舒張壓方面沒有交互作用(P=0.652)；與普通飲食組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠的平均動脈壓顯著升高(P=0.0001),小鼠周齡對平均動脈壓的影響沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.212),小鼠周齡與糖尿病在影響小鼠平均動脈壓方面沒有交互作用(P=0.263)。
　　 3.ApoE-/-/LD

12、LR-/-小鼠糖耐量試驗結(jié)果:IPGTT的結(jié)果表明,3周時普通飲食組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠的糖耐量試驗結(jié)果差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義:9周時普通飲食組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-鼠的糖耐量試驗結(jié)果差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)；隨后注射小劑量鏈脲佐菌素,11周時普通飲食組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠與糖尿病組ApoE-/-/LDLR

13、-/-小鼠的糖耐量試驗結(jié)果差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。普通飲食組不同周齡的糖耐量試驗結(jié)果差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義；糖尿病組不同周齡的糖耐量試驗結(jié)果差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 4.ApoE-/-/LDLR-/-小鼠血糖代謝指標(biāo)比較結(jié)果:在24周齡時,與普通飲食組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠血糖、血清胰島素以及胰島素抵抗指數(shù)均明顯升高(P=0.028,P=0.025,P=0

14、.015),表明2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠存在高血糖、高胰島素血癥和胰島素抵抗。
　　 5.ApoE-/-/LDLR-/-小鼠動脈IMT變化結(jié)果:ApoE-/-/LDLR-/-小鼠頭臂干動脈IMT變化早于頸動脈。ApoE-/-/LDLR-/-小鼠頭臂干動脈IMT在16周齡時,兩組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)；差異維持至24周齡。ApoE-/-/LDLR-/-小鼠頸動脈IMT始終保持較慢的增長；至22

15、周齡時,兩組小鼠頸動脈IMT差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.022)；24周齡時,與普通飲食組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠頸動脈IMT相比,2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠頸動脈IMT進(jìn)一步增加(P=0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 (1)3周齡雄性ApoE-/-/LDLR-/-小鼠經(jīng)高脂高糖飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(75mg/kg)誘發(fā)糖尿病狀態(tài)穩(wěn)定；
　　 (2)ApoE-/-/LDLR-/-