脲類除草劑異丙隆殘留酶聯(lián)免疫分析方法的建立.pdf

1、本論文針對目前脲類除草劑殘留分析問題，開展了異丙隆農(nóng)藥的免疫分析技術(shù)研究。主要內(nèi)容包括異丙隆人工抗原合成、多克隆抗體制備和相應(yīng)的ELISA 檢測方法的建立。 1.人工抗原的合成及鑒定 以N-甲基吡咯環(huán)酮為反應(yīng)起始原料，堿性條件下水解制得中間產(chǎn)物N-甲基丁酸，然后與對異丙基苯異氰酸酯反應(yīng)得半抗原Hapten4C【1-(3-丙基羧基)-3-(4-異丙基苯基)-1-甲基脲】；以N-甲基己內(nèi)酰胺為反應(yīng)起始原料，酸性條件下水解制

2、得中間產(chǎn)物N-甲基已酸，然后與對異丙基苯異氰酸酯反應(yīng)，制得另一半抗原Hapten6C【1-(5-戊基羧基)-3-(4-異丙基苯基)-1-甲基脲】。以紅外、核磁共振H1NMR、薄層色薄、熔點測定鑒定所制半抗原的化學(xué)結(jié)構(gòu)。兩半抗原以活性酯法分別與牛血清蛋白和卵清蛋白偶聯(lián)，制得免疫原Hapten6C-BSA 及包被原Hapten4C-OVA。對合成的人工抗原進行紫外光譜鑒定（偶聯(lián)比分別為1:46、1:36）。 2.多克隆抗體的制備

3、 免疫動物制備特異性抗體:用免疫原Hapten6C-BSA 分別免疫三只新西蘭大白兔(編號A4746、A5051、A5205)，采用背部皮下多點注射法經(jīng)過六次免疫制得異丙隆抗血清，效價分別為1:160000、1:80000、1:20000。 3.異丙隆ELISA 試驗條件 比較兩種包被原Hapten4C-OVA、Hapten6C-OVA對檢測靈敏度的影響，以Haptan6C-OVA包被測得的抑制中濃度(I50)

4、為500ng/mL，以Haptan4C-OVA包被測得的抑制中濃度(I50)值為70ng/mL,兩者具有顯著差別。以A4746 抗血清和包被原Hapten4C-OVA建立間接競爭酶免疫分析法。 4.異丙隆ELISA 法分析標準曲線及特異性 異丙隆酶聯(lián)免疫測定法的回歸方程I = (22.888+ 0.043C0.744)/(24.067+C0.744)，抑制中濃度I50=70ng/mL，最低檢測限(I10)為5ng/m

5、L?？贵w對甲醇有一定耐受能力，待測樣品中甲醇含量不易超過10％?？贵w對異丙隆具有高度的特異性，與其它六種脲類除草劑氯溴隆、綠谷隆、特丁塞隆、賽苯隆、草不隆、伏草隆的交叉反應(yīng)率低于0.1％。 5.樣品回收率的測定分別對水樣和土壤中的異丙隆進行添加回收試驗，水樣中的樣品加標回收率 在90％-115％，變異系數(shù)為1.75％~7.02％。而土壤中的樣品加標回收率在117％~160％,變異系數(shù)為3.10％~6.65％。該方法可用