紅細(xì)胞生成素對體外培養(yǎng)許旺細(xì)胞分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子和細(xì)胞周期的影響.pdf

1、目的：觀察和評價紅細(xì)胞生成素(erythropoietin,EPO)對體外培養(yǎng)許旺細(xì)胞(Schwann cells,SCs)分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子和細(xì)胞周期的影響,探討EPO促進(jìn)周圍神經(jīng)再生的機(jī)制。
　　方法：選用6只兩周齡的新西蘭兔作為實驗動物,經(jīng)75％酒精浸泡20min消毒,無菌條件下取雙側(cè)坐骨神經(jīng)和臂叢神經(jīng),在顯微鏡下剝干凈神經(jīng)外膜,將神經(jīng)剪成0.5cm×0.5cm×0.5cm的小植塊,用植塊法+酶消化法+差速貼壁法培養(yǎng)純化許旺細(xì)

2、胞。實驗設(shè)對照組(A組):20％胎牛血清DMEM液;實驗組1(B組):20％胎牛血清DMEM液+0.5U/ml EPO;實驗組2(C組):20％胎牛血清DMEM液+5U/ml EPO。1.于細(xì)胞培養(yǎng)第24h、48h、72h分別對各組許旺細(xì)胞應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定培養(yǎng)上清液中的神經(jīng)生長因子(NGF)和睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)。2.于細(xì)胞培養(yǎng)第24h分別對各組許旺細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布,比較SCs處于S期百分

3、比(S％)和增殖指數(shù)PI值(S+G2M)％。
　　結(jié)果：1.許旺細(xì)胞培養(yǎng)第24h、48h、72h,在各時間點細(xì)胞培養(yǎng)液中NGF的含量,A組與B組、A組與C組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),B組與C組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);在各時間點細(xì)胞培養(yǎng)液中CNTF的含量,A組與B組、A組與C組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),B組與C組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。2.許旺細(xì)胞培養(yǎng)第24h,細(xì)胞處于S期百分比(

4、S％),A組與B組、A組與C組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),B組與C組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05):細(xì)胞增殖指數(shù)PI值(S+G2M)％,A組與B組、A組與C組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),B組與C組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：1.EPO可促進(jìn)體外培養(yǎng)許旺細(xì)胞分泌NGF和CNTF,且具有劑量依賴性;2.EPO可影響體外培養(yǎng)許旺細(xì)胞的細(xì)胞周期,提高許旺細(xì)胞的增殖活性;3.EPO可提高體外培