紅細(xì)胞生成素對(duì)raw264.7細(xì)胞炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激的影響

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文紅細(xì)胞生成素對(duì)RAW264.7細(xì)胞炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激的影響姓名：皮婧靜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：黃湖輝20080530◇塞。。忽慧曼 紅細(xì)胞生成素對(duì)R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激的影響研究目的本研究探討E P O 預(yù)孵育的R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞經(jīng)L P S 刺激后，炎癥因子T N F ．Q 、I L ．11 3 及T G F 一1 3I m R N A 表達(dá)、蛋白分泌以

2、及細(xì)胞內(nèi)R O S 含量的變化情況，以及E P O 預(yù)孵育濃度和時(shí)間的影響，并探討上述作用的可能機(jī)制材料與方法R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞，予含1 0 ％胎牛血清的D M E M 高糖培養(yǎng)基，置3 7 ℃，5 ％C 0 2的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞接種入六孔板，分別檢測(cè)不同濃度梯度和不同時(shí)間梯度L P S 刺激R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞后n 嚇．Q 、I L ．11 3 、T G

3、F ．Bl 的m R N A 表達(dá)水平，結(jié)合文獻(xiàn)選出合適的L P S 刺激濃度和檢測(cè)時(shí)間。E P O對(duì)R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激影響的實(shí)驗(yàn)，根據(jù)E P O 預(yù)孵育時(shí)間不同分為I 和I I 兩個(gè)大組，I 組E P O 預(yù)孵育2 小時(shí)，I I 組預(yù)孵育4 小時(shí)。每組分為：空白對(duì)照組( 正常培養(yǎng)基孵育) 、L P S 處理組( 0 ．5 u g ／m l L P S 刺激8 小時(shí)) 和E P O 處理組( E P O

4、 預(yù)孵育后O ．5 u ∥m l L P S 刺激8 小時(shí)) ，E P O 處理組又分為A 、B 、C 、D 四組，E P O 濃度分別為5 U ／m l 、1 0 U ／m l 、5 0 U ／m l 、1 0 0 U ／m l 。用R T - P C R和E L I S A 法分別檢測(cè)前炎癥因子n 師一Q 、I L ．11 3 、T G F ．1 3l 的m R N A 表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平，流式細(xì)胞儀檢測(cè)反映細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激水平

5、的平均熒光強(qiáng)度。結(jié)果L P S 刺激R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞后前炎癥因子n 師．C t 、I L ．11 3 的m R N A 表達(dá)和蛋白水平以及T G F ．BI 的m R N A 水平都明顯升高( p < O ．0 5 ) 。E P O 預(yù)孵育后，上述前炎癥因子m R N A 表達(dá)和蛋白水平較L P S 刺激組都有明顯下降( p < O 。0 5 ) ，而且E P O 濃度越高，上述前炎癥因子m R N A 表

6、達(dá)和蛋白水平越低；E P O 預(yù)孵育4 小時(shí)與預(yù)孵育2 小時(shí)相比細(xì)胞內(nèi)的炎癥因子的水平?jīng)]有明顯差別。E P O 預(yù)孵育后，各組細(xì)胞內(nèi)R O S 含量的變化趨勢(shì)與上述炎癥因子類(lèi)似。結(jié)論E P O 可下調(diào)L P S 刺激的鼬州2 6 4 ．7 細(xì)胞炎癥因子T N F —a 、I L - 11 3 、T G F 一1 3l 的m R N A 和蛋白表達(dá)，降低胞內(nèi)的R O S 含量；上述作用與E P O 的濃度呈正相關(guān)；提示E P O 可劑量依