經(jīng)靜脈移植骨髓間質(zhì)干細胞治療急性心肌梗死的實驗研究.pdf

1、第一部分經(jīng)靜脈移植的人源骨髓間質(zhì)干細胞歸巢大鼠的梗死心臟;目的:探討經(jīng)外周靜脈途徑移植的人源性骨髓間質(zhì)干細胞在急性心肌梗死大鼠體內(nèi)的分布規(guī)律,為將來可能的臨床應(yīng)用做初步的探索.方法從健康志愿者獲取原代骨髓間質(zhì)干細胞行體外培養(yǎng)、擴增,結(jié)扎雄性SD大鼠冠狀動脈左前降支制備心肌梗死模型,72h后分別經(jīng)心梗、正常、假手術(shù)大鼠尾靜脈注射骨髓間質(zhì)干細胞1×10<'6>,移植術(shù)后48h處死動物,于心、肺、肝、脾取材,免疫組化法觀察BrdU標記的移植細

2、胞在多個臟器的分布情況;用同樣方法觀察移植術(shù)后1個月標記細胞在各組心臟的分布情況.結(jié)論:人源性骨髓間質(zhì)干細胞經(jīng)外周靜脈移植后可歸巢至大鼠的梗死心臟并存活1個月,可能成為將來治療急性心肌梗死的另一種選擇.第二部分 經(jīng)靜脈移植骨髓間質(zhì)干細胞可改善大鼠梗死心臟的功能;目的:探討經(jīng)外周靜脈途徑移植骨髓間質(zhì)干細胞治療急性心肌梗死的有效性和可能的機制.方法采用左前降支冠狀動脈結(jié)扎術(shù)制備大鼠心肌梗死模型,24h后經(jīng)尾靜脈注入同種異體骨髓間質(zhì)干細胞或磷

3、酸緩沖液;分別于移植后3d和1月取材,采用ELISA和免疫組化技術(shù)分析細胞移植對梗死心臟血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達的影響,通過免疫組化染色觀察移植細胞的分化情況和計數(shù)血管密度;超聲心動圖及血流動力學檢查監(jiān)測移植術(shù)后上述時間點大鼠心功能的變化.結(jié)論:通過促進梗死周邊缺血心肌的血管新生和移植細胞分化,骨髓間質(zhì)干細胞經(jīng)外周靜脈的移植可作為急性心肌梗死治療的另一條有效路徑.第三部分 梗死心臟SDF-1的高表達可能有助于骨髓間質(zhì)干細胞的定向

4、歸巢;目的:通常認為間質(zhì)細胞源性因子(Stromal Derived Factor-1,SDF-1)是骨髓源性干細胞歸巢過程中的關(guān)鍵因素,本試驗分別檢測了心梗以后不同時間點SDF-1的表達情況,試圖驗證一種假設(shè):宿主梗死心肌SDF-1的高表達有助于骨髓間質(zhì)干細胞歸巢至缺血的心臟并進一步改善心功能.方法從雄性SD大鼠獲取原代骨髓間質(zhì)干細胞,經(jīng)體外擴增、BrdU標記,結(jié)扎同品系大鼠冠脈左前降支建立心梗模型,1/2d、1d、2d、4d、8d、

5、16d后分別處死5只,用RT-PCR和Western blot方法分別檢測梗死心臟各時間點SDF-1的表達.剩余心梗大鼠按上述時間點隨機分為6組(n=15),每只動物在心梗后相應(yīng)的各時間點分別經(jīng)尾靜脈注入5×10<'6>的同種異體骨髓間質(zhì)干細胞,3天后處死5只,計數(shù)歸巢至缺血心臟的標記細胞的數(shù)量,其余動物于移植后1月處死,分別采用組織學和免疫組化的方法觀察膠原的含量,血管新生數(shù)量和細胞分化情況,超聲心動圖檢測心梗前、細胞移植前、移植后1