心肌營養(yǎng)素-1促心肌成纖維細(xì)胞增殖的作用及信號轉(zhuǎn)導(dǎo).pdf

1、目的：研究心肌營養(yǎng)素-1(cardiotrophin-1，CT-1)在高靜水壓促心肌成纖維細(xì)胞增殖中的作用，闡明CT-1促心肌成纖維細(xì)胞增殖的信號通路以及CT-1調(diào)節(jié)心肌成纖維細(xì)胞增殖與促凋亡基因Bad、分化抑制基因Id3的關(guān)系。 方法：消化、差速貼壁法原代培養(yǎng)心肌成纖維細(xì)胞，3-4代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，抗纖維連接蛋白抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定。利用自制周期性壓力培養(yǎng)裝置模擬體內(nèi)高血壓，對心肌成纖維細(xì)胞

2、進(jìn)行處理，隨機(jī)分為：(1)對照組，(2)壓力組，(3)壓力+CT-l反義寡核苷酸組，(4)壓力+CT-1正義寡核苷酸組，(5)壓力+Jak／STAT3阻斷劑(AG490)組，后四組進(jìn)行160mmHg壓力培養(yǎng)8小時，采用MTT法檢測細(xì)胞增殖，RT-PCR(包括細(xì)胞裂解、總RNA的提取、逆轉(zhuǎn)錄、PCR)測細(xì)胞內(nèi)信號通路STAT<,3>mRNA及凋亡基因BadmRNA、分化抑制基因Id<,3>mRNA的表達(dá)，用Western-blotting

3、檢測CT-1的蛋白表達(dá)。 結(jié)果：(1)與對照組相比，壓力刺激組心肌成纖維細(xì)胞明顯增殖(0.153±0.01lvs0.115±0.012，p<0.01)，而Jak／STAT3通路阻斷劑AG490干預(yù)后心肌成纖維細(xì)胞增殖明顯減弱(0.153±0.01lvs0.135±0.015，p<0.05)，CT-1反義寡核苷酸干預(yù)后細(xì)胞增殖亦明顯減弱(0.132±0.13vsO.153±0.11，p<0.05)。 (2)與對照組相比，壓

4、力刺激組CT-1蛋白明顯增加(1-56±0.24 VS0.95±0.19，p<0.05)，STAT3mRNA和BadmRNA表達(dá)上調(diào)(0.539±0.013 VS0.398±0.011vs；0.513±0.025 VS 0.325±0.023，P均<0.05)，但分化抑制基因Id3mRNA表達(dá)無明顯變化(0.592±0.019 VS 0.567±0.026，P>0.05)。 (3)CT-l反義寡核苷酸干預(yù)后，明顯抑制CT-1蛋白

5、的表達(dá)(1.56±0.24 VS1.03±0.21，P<0.01)；下調(diào)STAT3mRNA和BadmRNA表達(dá)(0.518±0.012vs0.353±0.014vs，0.502±0.022 VS 0.313±0.019，P均<0.05)，Id3mRNA(0.592±0.019 VS 0.306±0.021，P<0.01)表達(dá)明顯減少。而CT-1正義寡核苷酸對結(jié)論： (1)高靜水壓能刺激心肌成纖維細(xì)胞增殖，CT-1蛋白表達(dá)明顯增加

6、，而CT-1反義寡核苷酸明顯抑制高靜水壓的促增殖作用，表明CT-1在高靜水壓促心肌成纖維細(xì)胞增殖中起重要作用。 (2)壓力刺激心肌成纖維細(xì)胞明顯增殖，CT-1和STAT3mRNA的表達(dá)顯著增加，而加入CT-1反義寡核苷酸后，CT-1和STAT3mRNA的表達(dá)均明顯減少，心肌成纖維細(xì)胞增殖減弱；Jak／STAT3通路阻斷劑AG490干預(yù)后，心肌成纖維細(xì)胞增殖亦明顯減弱；表明Jak／STAT3信號通路是CT-1促心肌成纖維細(xì)胞增殖的