shRNA對乳腺癌細(xì)胞VEGF-C表達(dá)的抑制作用.pdf

1、目的：觀察RNA干擾技術(shù)（RNAi）對乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞VEGF-C表達(dá)的影響。 方法：制備針對VEGF-C的三種siRNA（small interfering RNA），分別是siRNAa、siRNAb、siRNAc，篩選靶向基因最有效的siRNA，據(jù)此設(shè)計(jì)shRNA（short hairpin RNA）寡核苷酸鏈，構(gòu)建pGenesil-1/VEGF-C重組質(zhì)粒表達(dá)載體。將此質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231

2、，采用RT-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)染色法和Western blot方法檢測VEGF-C的變化情況。 結(jié)果：RT-PCR結(jié)果顯示siRNAa、b、c對MDA-MB-231均有抑制作用，以siRNAa最顯著，抑制率為72.1％。利用針對siRNAa合成的shRNA與質(zhì)粒pGenesil-1成功構(gòu)建表達(dá)載體pGenesil-1/VEGF-C，轉(zhuǎn)染MDA-MB-231后，RT-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)染色法和Western blot方法檢測均