絲素蛋白結(jié)合骨髓基質(zhì)干細胞誘導(dǎo)的成骨細胞修復(fù)骨缺損的實驗研究.pdf

1、目的探討以絲素蛋白為支架以骨髓基質(zhì)干細胞體外誘導(dǎo)的成骨細胞為種子細胞修復(fù)兔橈骨骨缺損的可行性。方法從4～8周齡的新西蘭大白兔的左右兩側(cè)股骨大轉(zhuǎn)子部抽取骨髓，應(yīng)用密度梯度離心法和貼壁培養(yǎng)法進行骨髓基質(zhì)干細胞的分離和純化。然后再進行體外的培養(yǎng)，擴增和傳代，取體外擴增的第二傳代細胞向成骨細胞誘導(dǎo)，觀察其堿性磷酸酶活性以及細胞礦化作用。取體外誘導(dǎo)分化的第三代成骨細胞制成濃度為2×107個／毫升的細胞懸液接種到絲素蛋白支架上制成細胞載體復(fù)合物。將

2、細胞載體復(fù)合物植入兔的橈骨骨缺損處，分別于術(shù)后4，8，12周取材，進行組織學(xué)，X線觀察。并按Nilsson等骨愈合組織學(xué)評分標準和Lane等骨愈合的X線評分標準進行評分。結(jié)果原代培養(yǎng)的骨髓基質(zhì)干細胞首先形成細胞集落，14天時集落間接近融合；傳代細胞體積變大，約5-7天傳代一次。誘導(dǎo)條件下堿性磷酸酶活性明顯增高，并出現(xiàn)礦化結(jié)節(jié)。絲素蛋白支架材料孔徑在200μm～300μm之間，孔隙率95％，孔隙分布較均勻，孔隙連通性好?？箟簭姸葹?0MP

3、a，抗折強度為4．0MPa。組織學(xué)染色，X線觀察表明：植入細胞-載體復(fù)合物組(A組)：骨缺損處4周即有骨痂形成，可見大量幼稚骨及骨小梁。隨著時間的推移，骨痂增加，12周時骨缺損完全骨性修復(fù)。植入絲素蛋白支架材料組(B組)：4周可見支架與骨連接處有少許軟骨痂。8周時支架部分吸收，吸收部位骨痂替代。12周時支架材料大部分被吸收，新骨長入，部分皮質(zhì)骨形成。不作任何的處理組(C組)：4，8，12周時骨缺損處均為纖維組織充填。結(jié)論骨髓基質(zhì)干細胞經(jīng)