富血小板血漿誘導(dǎo)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察富血小板血漿(Platelet-rich plasma，PRP)對體外培養(yǎng)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow stromal cells，BMSCs)的增殖和成骨細(xì)胞分化作用，為PRP應(yīng)用于骨組織工程提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: 從8只兔子雙側(cè)股骨大轉(zhuǎn)子抽取骨髓，采用密度梯度離心法和傳代篩選貼壁細(xì)胞的方法體外分離、培養(yǎng)兔BMSCs，并對所培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行生長特性的觀察。采用自身對照，將取得的第三代BMSCs分為實(shí)

2、驗(yàn)組和對照組，實(shí)驗(yàn)組用1％PRP進(jìn)行干預(yù)，對照組的培養(yǎng)液中加入地塞米松10<,'-8>mol/l，β-磷酸甘油鈉(β-glycerophosphate，β-GP)10<'-3>mol/l，維生素C 50 mg/l，倒置相差顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞增殖情況。通過倒置顯微鏡、堿磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)測定和茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色等手段對獲得的細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)特性研究。 結(jié)果: 1、原代培養(yǎng)細(xì)胞接

3、種后見大量比較一致的圓形細(xì)胞24．36h后開始貼壁，貼壁細(xì)胞多呈多角形、橢圓形或梭形。48-72h時(shí)貼壁細(xì)胞呈短梭形或星形。4d時(shí)見細(xì)胞集落增殖數(shù)十個(gè)、上百個(gè)，中心部位細(xì)胞輪廓不清，周邊細(xì)胞呈細(xì)梭形，向周圍呈輻射狀排列。6d時(shí)貼壁細(xì)胞大部分呈梭形，少部分細(xì)胞呈多角形，細(xì)胞接觸緊密，部分區(qū)域融合成片。10-12d細(xì)胞融合成單層，呈典型細(xì)長梭形外觀，集束狀排列。隨著培養(yǎng)時(shí)間繼續(xù)延長，逐漸形成多個(gè)致密的島狀細(xì)胞結(jié)構(gòu)， 1月后形成鈣化結(jié)節(jié)。

4、 2、實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞培養(yǎng)第2天，已貼壁，貼壁細(xì)胞呈集落生長第3天，細(xì)胞呈細(xì)梭形，輻射狀排列。第6天，細(xì)胞大部融合，細(xì)胞呈魚群狀排列。第10天，細(xì)胞大量增殖，細(xì)胞由梭形向多角形、方形轉(zhuǎn)化，突起縮短。對照組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化較實(shí)驗(yàn)組晚出現(xiàn)1-3天。 3、實(shí)驗(yàn)組以及對照組的ALP在第10天時(shí)ALP達(dá)到最高水平，隨后出現(xiàn)下降趨勢經(jīng)過檢驗(yàn)，各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組的ALP水平較對照組均明顯升高(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色后，在

5、顯微鏡下，可以清晰的顯示鈣結(jié)節(jié)情況。ALP檢測、茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色顯示采用本法在體外培養(yǎng)的兔成骨細(xì)胞生長良好，生化指標(biāo)穩(wěn)定，表現(xiàn)出與典型的成骨細(xì)胞相似的形態(tài)特征和生物學(xué)特性。 結(jié)論: 1、富血小板血漿具有促進(jìn)體外培養(yǎng)的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的作用。 與傳統(tǒng)的地塞米松、β-磷酸甘油鈉、維生素C等誘導(dǎo)物相比，富血小板血漿的這一作用更顯著。 2、由于富血小板血漿具有采集方便、價(jià)格便宜、向成骨細(xì)胞分化能力