膀胱起搏點(diǎn)及其與逼尿肌不穩(wěn)定的關(guān)系初探.pdf

1、逼尿肌不穩(wěn)定(detrusor instability，DI)是臨床上最常見(jiàn)的膀胱功能障礙，發(fā)生率極高，在下尿路梗阻患者中高達(dá)39％，可引起尿頻、尿急、急迫性尿失禁等臨床癥狀，對(duì)患者的生活質(zhì)量造成了很大的影響，嚴(yán)重者甚至?xí)?dǎo)致腎、輸尿管積水和腎功能損害。然而令人遺憾的是，由于DI的發(fā)病機(jī)制尚不明確，現(xiàn)治療DI的藥物效果均不能讓人滿意。
　　 最新的研究已經(jīng)證明膀胱逼尿肌是一種具有特殊的肌源性興奮性的組織。逼尿肌自身興奮性的改變很

2、可能與DI的發(fā)生有著密切的關(guān)系。而膀胱這種興奮的起源則很可能是與胃腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞相類似的膀胱ICCs樣細(xì)胞。而若膀胱ICCs樣細(xì)胞要控制逼尿肌在發(fā)生DI時(shí)協(xié)調(diào)一致收縮，則應(yīng)該有一個(gè)主要的膀胱起搏點(diǎn)，但相關(guān)研究結(jié)果尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 本課題通過(guò)建立大鼠的DI模型，并研究DI大鼠膀胱ICCs樣細(xì)胞在頂、體、底及三角區(qū)四個(gè)不同部位與對(duì)照組相比在數(shù)目、功能、興奮性及信號(hào)傳導(dǎo)各個(gè)方面的變化特點(diǎn)，從而初步確定膀胱起搏點(diǎn)的位置，并對(duì)其

3、與逼尿肌不穩(wěn)定的關(guān)系作一個(gè)系統(tǒng)的探討，希望對(duì)逼尿肌不穩(wěn)定的發(fā)病機(jī)制及相關(guān)治療的研究提供一定的借鑒。
　　 第一部分、大鼠逼尿肌不穩(wěn)定模型的建立
　　 目的：建立大鼠逼尿肌不穩(wěn)定模型并進(jìn)行評(píng)估，為后續(xù)的對(duì)逼尿肌不穩(wěn)定的深入研究提供一個(gè)可靠的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。
　　 方法：選取雌性wistar大鼠25只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組15只和對(duì)照組10只。實(shí)驗(yàn)組大鼠行膀胱出口部分結(jié)扎術(shù)建立模型，術(shù)后6周對(duì)兩組大鼠進(jìn)行充盈性膀胱測(cè)壓并評(píng)估尿動(dòng)

4、力學(xué)檢測(cè)結(jié)果。
　　 結(jié)果：建模組15只大鼠術(shù)后2只死亡，剩余13只大鼠于術(shù)后第6周行充盈性膀胱測(cè)壓，結(jié)果9只出現(xiàn)逼尿肌不穩(wěn)定的表現(xiàn)，DI發(fā)生率為69.2％，2只未發(fā)生DI，2只膀胱測(cè)壓未見(jiàn)明顯收縮波。測(cè)壓結(jié)果分析，DI組大鼠的膀胱排尿壓、膀胱容量、排尿量、殘余尿比對(duì)照組均顯著增加。
　　 結(jié)論：逼尿肌不穩(wěn)定大鼠的膀胱功能在梗阻早期有明顯的代償性增強(qiáng)。對(duì)大鼠膀胱出口進(jìn)行部分結(jié)扎并在術(shù)后6周左右麻醉下行插管測(cè)壓是建立逼尿肌

5、不穩(wěn)定模型更為簡(jiǎn)便、可靠并可廣泛推廣的方法。
　　 第二部分、ICCs樣細(xì)胞在DI大鼠膀胱不同部位的分布及c-kit表達(dá)差異
　　 目的：檢測(cè)DI組大鼠與對(duì)照組大鼠相比膀胱不同部位ICCs樣細(xì)胞數(shù)目及功能上的變化特點(diǎn)。
　　 方法：(1)通過(guò)特異性c-kit免疫熒光染色鑒定大鼠膀胱中的ICCs樣細(xì)胞，并比較DI組與正常大鼠膀胱頂部、體部、底部及三角區(qū)ICCs樣細(xì)胞的分布差異及兩組大鼠間相同部位細(xì)胞數(shù)量上的變化幅度

6、；(2)運(yùn)用Western blot法從蛋白水平比較兩組大鼠內(nèi)各個(gè)不同部位及兩組大鼠間相同部位ICCs樣細(xì)胞的c-kit表達(dá)差異。
　　 結(jié)果：(1)DI組及對(duì)照組膀胱頂部ICCs樣細(xì)胞數(shù)目均顯著大于其他三個(gè)部位，而DI組各個(gè)部位的細(xì)胞數(shù)目均較對(duì)照組明顯增加，頂部的增長(zhǎng)幅度最大；(2)DI組大鼠各部位c-kit蛋白表達(dá)較對(duì)照組相應(yīng)部位明顯增加。對(duì)照組大鼠膀胱各部位c-kit蛋白表達(dá)無(wú)顯著差異，DI組大鼠膀胱頂部的c-kit表達(dá)明

7、顯多于其它三個(gè)部位，而其它三個(gè)部位之間的c-kit表達(dá)無(wú)顯著差異。
　　 結(jié)論：大鼠膀胱頂部的ICCs樣細(xì)胞在DI時(shí)在數(shù)量上及c-kit表達(dá)上與其它部位有明顯差異，且較正常大鼠相同部位的變化也最明顯，證實(shí)了膀胱ICCs樣細(xì)胞在DI時(shí)細(xì)胞數(shù)量和功能明顯增強(qiáng)，也提示膀胱頂部很可能是膀胱起搏點(diǎn)的位置所在。
　　 第三部分、DI大鼠膀胱不同部位ICCs樣細(xì)胞HCN通道蛋白表達(dá)差異
　　 目的：檢測(cè)DI組大鼠與對(duì)照組大鼠相

8、比膀胱不同部位ICCs樣細(xì)胞興奮性的變化特點(diǎn)。
　　 方法：(1)通過(guò)免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)鑒定膀胱ICCs樣細(xì)胞表達(dá)HCN2通道蛋白；(2)通過(guò)Wetern blot及RT-PCR技術(shù)從蛋白及基因水平分別檢測(cè)兩組大鼠內(nèi)各個(gè)不同部位及兩組大鼠間相同部位ICCs樣細(xì)胞的HCN2表達(dá)差異。
　　 結(jié)果：(1)膀胱ICCs樣細(xì)胞有通道蛋白HCN2的表達(dá)；(2)DI組大鼠各部位HCN2蛋白表達(dá)較對(duì)照組相應(yīng)部位明顯增加。對(duì)照組大鼠膀胱各

9、部位HCN2表達(dá)無(wú)顯著差異，DI組大鼠膀胱頂部的HCN2的表達(dá)明顯多于其它三個(gè)部位，而其它三個(gè)部位之間的HCN2表達(dá)無(wú)顯著差異。
　　 結(jié)論：大鼠膀胱頂部的ICCs樣細(xì)胞在DI時(shí)在HCN2的轉(zhuǎn)錄及翻譯水平上與其它部位有明顯差異，且較正常大鼠相同部位的變化也最明顯，進(jìn)一步證實(shí)了膀胱ICCs樣細(xì)胞在DI時(shí)細(xì)胞興奮性明顯增強(qiáng)，也再一次證明了膀胱起搏點(diǎn)很可能在膀胱頂部。
　　 第四部分、DI大鼠不同部位膀胱組織中connexin

10、43蛋白表達(dá)差異
　　 目的：檢測(cè)DI組大鼠與對(duì)照組大鼠相比膀胱不同部位組織中信號(hào)傳導(dǎo)的變化特點(diǎn)。
　　 方法：(1)通過(guò)免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)鑒定縫隙連接蛋白connexin43的分布情況；(2)通過(guò)Wetern blot技術(shù)從蛋白水平比較兩組大鼠內(nèi)各個(gè)不同部位及兩組大鼠間相同部位逼尿肌組織中connexin43的表達(dá)差異。
　　 結(jié)果：(1)膀胱逼尿肌組織中有connexin43蛋白的表達(dá)，且主要存在于膀胱ICCs

11、樣細(xì)胞上；(2)DI組大鼠各部位connexin43表達(dá)較對(duì)照組相應(yīng)部位明顯增加。對(duì)照組大鼠膀胱各部位connexin43表達(dá)無(wú)顯著差異，DI組大鼠膀胱頂部的connexin43比其它三個(gè)部位明顯增強(qiáng)，而其它三個(gè)部位之間的connexin43表達(dá)無(wú)顯著差異。
　　 結(jié)論：首次發(fā)現(xiàn)大鼠膀胱頂部的ICCs樣細(xì)胞在DI時(shí)縫隙連接蛋白connexin43表達(dá)與其它部位有明顯差異，且較正常大鼠相同部位的變化也最明顯，進(jìn)一步證實(shí)了膀胱ICC