中國大棗資源化學(xué)研究.pdf

1、本論文研究工作為國家自然科學(xué)基金項目-“大棗與大戟類藥材配伍減毒機理研究”和《中國藥典》2010年版“大棗藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂”項目的部分研究內(nèi)容。 本論文共分兩章內(nèi)容。第一章系統(tǒng)地總結(jié)了大棗種質(zhì)資源、化學(xué)成分、藥理效應(yīng)、營養(yǎng)成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)代研究進展。 第二章為大棗資源化學(xué)研究部分，共分五節(jié)，具體研究內(nèi)容及結(jié)論如下： 第一節(jié)中國大棗資源分布及藥用大棗資源現(xiàn)狀調(diào)查。采用文獻調(diào)研及實地考查的形式，對我國大棗主要產(chǎn)區(qū)進

2、行了初步調(diào)查。按照地形地貌、水文、生態(tài)環(huán)境及主栽品種差異，將我國北方棗產(chǎn)區(qū)初步劃分為13個主要產(chǎn)區(qū)。并對我國藥用大棗資源現(xiàn)狀進行了調(diào)查及思考。 第二節(jié)大棗化學(xué)成分研究。采用硅膠柱層析及聚酰胺柱層析等色譜技術(shù)對大棗所含化學(xué)成分進行分離、純化，根據(jù)其理化性質(zhì)及波譜數(shù)據(jù)鑒定其結(jié)構(gòu)。結(jié)果從大棗的水提取物和乙醇提取物中共分離鑒定了23個化合物，其中13個為三萜酸類，分別為：大棗新酸（zizyberanal acid，1）、zizybere

3、nalic acid（3）、ceanothenic acid（4）、ursonic acid（5）、白樺脂酸（6）、zizyberanalic acid（7）、麥珠子酸（8），熊果酸（9）、ceanothic acid（10）、epiceanothic acid（11）、齊墩果酸（12）、2α-羥基齊墩果酸（13）和2α-羥基烏蘇酸（14）；2個神經(jīng)酰胺類：（2S，3S，4R，8E）-2-[（2'R）-2'-羥基二十四烷酰胺]-8-十八

4、烯-1，3，4-三醇（15）和1-O-β-D-吡喃葡萄糖-（2S，3S，4R，8E）-2-[（2'R）-2'-羥基二十四烷酰胺]-8-十八烯-1，3，4-三醇（16）；3個甾醇類：3β，6β-豆甾烷-4-烯-3，6-二醇（17）、β-谷甾醇（18）和胡蘿卜苷（19）；2個脂肪酸類：十七烷酸（20）和二十四烷酸（21）：此外尚有萘醌類（大棗萘醌，zizyberanone，2）、黃酮類（槲皮素-3-O-蕓香糖苷，22）和單糖類（D-葡萄糖，

5、23）成分。其中化合物1和2為新化合物，15和16為首次從棗屬植物中分得的神經(jīng)酰胺類化合物，化合物5、11、14、17、20和21為首次從該植物中分得。 第三節(jié)不同品種、不同產(chǎn)地大棗品質(zhì)評價。首次建立了一種用于同時測定大棗藥材中10種三萜酸類成分（ceanothic acid，麥珠子酸，大棗新酸，zizyberanalic acid，epiceanothic acid，ceanothenic acid，白樺脂酸，齊墩果酸，urs

6、onic acid和zizyberenalic acid）的HPLC-DAD含量測定方法。色譜條件為：采用Waters Sunfire C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，柱溫35℃，以乙腈-0.05％磷酸水溶液為流動相，梯度洗脫，流速1.0 mL/min，化合物1-9的檢測波長為205 nm，化合物10的檢測波長為238 nm。所測10個化合物的工作曲線在線性范圍內(nèi)均表現(xiàn)出較好的線性相關(guān)性（r2>0，9999）；其日內(nèi)和日

7、間精密度變化范圍分別為0.43-1.72％和0.53-2.45％，加樣回收率為94.98-104.09％。該方法成功應(yīng)用于同時測定22個產(chǎn)地36個栽培品種共計42批大棗樣品中10種三萜酸類成分含量。結(jié)果顯示，不同品種、不同產(chǎn)地大棗三萜酸含量有較大差異，其中山東沾化產(chǎn)冬棗品種總?cè)扑岷孔罡摺；跇悠分?0種三萜酸類成分含量差異，應(yīng)用系統(tǒng)聚類分析（HCA）和主成分分析（PCA）方法對樣品進行區(qū)分和歸類。結(jié)果顯示，山東沾化產(chǎn)冬棗品種與其他大

8、棗品種有較大差異，提示其親緣關(guān)系可能較遠。該方法測定的結(jié)果有助于更好地應(yīng)用大棗資源，也可從植物化學(xué)分類學(xué)角度為大棗植物進行種下界定提供幫助。 第四節(jié)大棗藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。以白樺脂酸和齊墩果酸為對照品，分別比較了不同提取溶劑、不同展開條件及不同顯色方法對大棗藥材薄層色譜鑒別的影響，確定了大棗藥材的TLC色譜條件。首次建立了大棗藥材白樺脂酸HPLC-ELSD含量測定方法。色譜條件為：采用Hypersil C18（250 mm×4.6

9、 mm，5μm）色譜柱，柱溫25℃，以乙腈-0.1％乙酸水溶液（81：19）為流動相，流速0.4 mL/min；ELSD條件：氣體壓力為35 psi（2.28 slpm），漂移管溫度為65℃，噴霧口溫度為36℃。 第五節(jié)大棗化學(xué)成分生物活性初步評價。采用MTT法（四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法），對從大棗中所分離得到的11個三萜酸類成分（白樺脂酸、大棗新酸、熊果酸、epiceanothic acid、ceanothenic ac

10、id、zizyberenalic acid、麥珠子酸、ceanothic acid、zizyberanalic acid、齊墩果酸和ursonic acid）以及1個萘醌類成分（大棗萘醌）進行了體外抑制人胃癌細胞（MGC-803）、人結(jié)腸癌細胞（HT-29）、人肺癌細胞（NCI-H460）、人肝癌細胞（HepG-2）增殖活性研究。結(jié)果顯示：熊果酸、zizyberenalic acid、zizyberanalic acid和齊墩果酸對上述

11、四種腫瘤細胞株均表現(xiàn)出一定抑制作用。提示上述四種化學(xué)成分可以作為腫瘤細胞增殖抑制劑，或作為抗腫瘤藥物先導(dǎo)化合物。 本論文的特色和創(chuàng)新點為： 1.以藥用大棗資源品種為研究對象，采用復(fù)合色譜分離分析方法和光譜技術(shù)，從中分離鑒定了23個化合物，其中兩個為未見報道的新化合物（大棗新酸和大棗萘醌），并首次在棗屬植物中分離得到神經(jīng)酰胺類化合物。 2.采用中藥資源化學(xué)的研究思路，應(yīng)用HPLC-DAD結(jié)合化學(xué)計量學(xué)的方法，對我國