手掌參醇提物對(duì)染矽塵大鼠肺組織腫瘤壞死因子-α及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β-,1-表達(dá)的影響.pdf

1、矽肺是由于長(zhǎng)期吸入游離二氧化硅(SiO2)粉塵所引起的以肺間質(zhì)纖維化為主的全身性疾病。根據(jù)我國(guó)衛(wèi)生部新聞辦公室在第十屆職業(yè)性呼吸系統(tǒng)疾病國(guó)際會(huì)議(10thICORD)新聞發(fā)布會(huì)上(2005.1.7)公布的數(shù)字：2003年全國(guó)報(bào)告各類(lèi)職業(yè)病發(fā)病數(shù)為10467例，其中塵肺病發(fā)病數(shù)占了80％。上世紀(jì)50年代以來(lái)我國(guó)累計(jì)報(bào)告塵肺病例58萬(wàn)多人，已死亡14萬(wàn)多人，現(xiàn)患者44萬(wàn)多人，相當(dāng)于世界其他國(guó)家該病人數(shù)的總和。專(zhuān)家估計(jì)塵肺實(shí)際發(fā)生的病例數(shù)不少

2、于100萬(wàn)例。我國(guó)矽肺病例占?jí)m肺總病例約50％，是塵肺中危害最嚴(yán)重的職業(yè)病之一。矽肺所造成的經(jīng)濟(jì)損失十分驚人，據(jù)專(zhuān)家估算，年直接經(jīng)濟(jì)損失約90億元人民幣，間接損失更大。目前，矽肺的發(fā)病機(jī)理尚不明確，臨床治療以非特異性抗炎和免疫抑制為主，缺乏有效的特異性治療。我國(guó)防治矽肺的藥物主要有克矽平(P204)、磷酸喹哌、羥基喹哌、檸檬酸鋁、矽肺寧、漢防己甲素以及某些中藥等，但是其療效不確切并大多有一定的毒副作用。因此，尋找一種安全有效、毒副作用小

3、的新型抗纖維化藥物成為急需解決的問(wèn)題。 手掌參(GymnadeniaconopseaR.Br)，系蘭科多年生草本植物手掌參的塊莖，廣泛分布東北、華北、西北及西藏等地，味甘微苦，性平，入肺、脾胃經(jīng)，有補(bǔ)益氣血、生津止渴、收斂止血、活血消瘀、滋補(bǔ)強(qiáng)壯之功。祖國(guó)醫(yī)學(xué)將肺纖維化歸入“咳嗽”、“喘證”、“肺痹”、“痰飲”、“肺痿”、“肺脹”、“短氣”等門(mén)中，治療以健脾溫肺、扶正固本，活血化瘀為主。目前，已經(jīng)分離出手掌參的菲類(lèi)和芪類(lèi)化合物有

4、14種，初步的藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，其中13種成分具有良好的抗炎、抗過(guò)敏作用，作用甚至強(qiáng)于傳統(tǒng)的抗過(guò)敏藥曲尼司特。而經(jīng)研究表明：曲尼司特具有抗博來(lái)霉素誘導(dǎo)的肺纖維化作用，提示手掌參可能有類(lèi)似作用。 目的：本研究以矽肺大鼠動(dòng)物模型為研究對(duì)象，從整體和形態(tài)學(xué)水平觀察手掌參醇提物對(duì)二氧化硅粉塵致大鼠肺纖維化的防治作用及其對(duì)染矽塵大鼠肺組織纖維化過(guò)程中關(guān)鍵的細(xì)胞因子TNF-α、TGF-β1表達(dá)的影響，探討手掌參醇提物抗肺纖維化可能作用機(jī)制，為

5、手掌參的藥理作用和臨床運(yùn)用提供理論依據(jù)。 方法：隨機(jī)將Wistar大鼠分為4個(gè)實(shí)驗(yàn)組，即對(duì)照組(control，CL組)、染矽塵組(silica-instilled,SA組)、手掌參組(GymnadeniaconopseaAlcoholExtract-treated，GcAE組)和漢防己組(Tetrandrine-treated，TT組)。氣管暴露法建立大鼠矽肺模型。模型建后24h，手掌參醇提物組每日給予手掌參醇提物(10g/k

6、g)灌胃，漢防己組隔日給予漢防己甲素溶液(50mg/kg)灌胃，對(duì)照組和染矽塵組則給予等量蒸餾水每日灌胃，如此直到將動(dòng)物處死。于7d、14d、21d、28d和60d5個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組分別取8只大鼠將其處死。HE染色觀察大鼠肺組織形態(tài)學(xué)的變化。血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)。組織芯片儀制作組織芯片，用免疫組織化學(xué)PV法檢測(cè)肺組織芯片TNF-α、TGF-β1的表達(dá)。天狼猩紅染色法結(jié)合偏振光顯微鏡觀

7、察肺組織Ⅰ、Ⅲ型膠原合成。用Image-ProPlusVersion4.5forwindowsTM圖象分析系統(tǒng)對(duì)圖像進(jìn)行分析。所有數(shù)值均用(-x)±s表示，不同組間的比較用單因素方差分析的LSD法，全部數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理均采用SPSS11.5forwindows分析軟件。 結(jié)果：1HE染色法證實(shí)氣管暴露注入二氧化硅粉塵懸液成功建立矽肺模型。 2手掌參對(duì)染矽塵大鼠肺臟器系數(shù)的影響。與對(duì)照組比較，染矽塵組大鼠各時(shí)間點(diǎn)肺臟器系數(shù)

8、高于對(duì)照組(P＜0.01)；分別與染矽塵組和對(duì)照組比較，手掌參組及漢防己組大鼠各時(shí)間點(diǎn)肺臟器系數(shù)低于染矽塵組，但高于對(duì)照組，差異有顯著性(P＜0.01)。 3手掌參對(duì)染矽塵大鼠BALF各種細(xì)胞類(lèi)型數(shù)量的影響。與對(duì)照組比較，染矽塵組、手掌參組和漢防己組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)BALF白細(xì)胞總數(shù)均不同程度增高，都具有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)；與染矽塵組比較，手掌參組和漢防己組各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)BALF白細(xì)胞總數(shù)均小于染矽塵組，差異有顯著

9、性(P＜0.01)。與對(duì)照組比較，染矽塵組各時(shí)間點(diǎn)BALF中性粒細(xì)胞數(shù)均高于對(duì)照組(P＜0.01)；與染矽塵組比較，除7d、14dBALF中性粒細(xì)胞數(shù)高于染矽塵組以外，其他時(shí)間點(diǎn)手掌參組和漢防己組BALF中性粒細(xì)胞數(shù)均減少，差異有顯著性(P＜0.05，P＜0.01)。與對(duì)照組相比，染矽塵組各時(shí)間點(diǎn)BALF單核巨噬細(xì)胞均高于對(duì)照組，差異有顯著性(P＜0.01)，手掌參組與染矽塵組相比，除28d、60d外，其他時(shí)間點(diǎn)的單核巨噬細(xì)胞數(shù)均減少(

10、P＜0.05)。與對(duì)照組比較，染矽塵組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)BALF淋巴細(xì)胞均不同程度增高，差異有顯著性(P＜0.05)，60d時(shí)達(dá)高峰；與染矽塵組比較，除7d、14dBALF中性粒細(xì)胞數(shù)高于染矽塵組以外，手掌參組和漢防己組其它各時(shí)間點(diǎn)BALF淋巴細(xì)胞數(shù)低于染矽塵組，差異有顯著性(P＜0.05) 4手掌參對(duì)染矽塵大鼠Ⅰ、Ⅲ膠原合成的影響。與對(duì)照組比較，染矽塵組、手掌參組和漢防己組各時(shí)間Ⅰ膠原均高于對(duì)照組，差異有顯著性(P＜0.01)；與染矽

11、塵組比較，手掌參組和漢防己組各時(shí)間點(diǎn)Ⅰ膠原低于染矽塵組組，差異有顯著性(P＜0.01)。與對(duì)照組比較，染矽塵組各時(shí)間點(diǎn)Ⅲ膠原都高于對(duì)照組(P＜0.01)；與染矽塵組比較，手掌參組和漢防己組各時(shí)間點(diǎn)Ⅲ膠原均低于染矽塵組，14d、21d差異有顯著性(P＜0.05，P＜0.01)。 5手掌參對(duì)染矽塵大鼠肺組織TNF-α蛋白表達(dá)的影響。與對(duì)照組比較，染矽塵組、手掌參組和漢防己組各時(shí)間點(diǎn)肺組織TNF-α的積分光密度均高于對(duì)照組(P＜0.0

12、1)，其表達(dá)高峰在染矽塵后的第21d；與染矽塵組比較，手掌參組和漢防己組各時(shí)間點(diǎn)肺組織TNF-α的積分光密度低于染矽塵組，差異有顯著性(P＜0.01)。 6手掌參對(duì)染矽塵大鼠肺組織TGF-β1蛋白表達(dá)的影響。與對(duì)照組比較，染矽塵組、手掌參組和漢防己組各時(shí)間點(diǎn)肺組織TGF-β1的積分光密度均高于對(duì)照組(P＜0.01)，表達(dá)高峰在28d；與染矽塵組比較，手掌參組各時(shí)間點(diǎn)肺組織TGF-β1的積分光密度均低于染矽塵組，差異有顯著性(P＜

13、0.05)；漢防己組各時(shí)間點(diǎn)肺組織TGF-β1的積分光密度均低于染矽塵組，21d、28d和60d時(shí)差異有顯著性(P＜0.05，P＜0.01)。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)認(rèn)為：1、大鼠支氣管內(nèi)滴入矽塵可引起大鼠肺組織炎性和纖維化性病理變化，并有矽結(jié)節(jié)形成。2、手掌參可以緩解矽塵誘導(dǎo)的大鼠肺臟器系數(shù)的增加。3、手掌參對(duì)矽塵誘導(dǎo)的大鼠BALF細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的顯著增加有緩解作用。4、手掌參能夠抑制矽塵誘導(dǎo)的大鼠肺組織Ⅰ、Ⅲ