線粒體K-,ATP-通道對(duì)多巴胺能神經(jīng)元保護(hù)作用研究.pdf

1、帕金森?。≒arkinson’s disease，PD）是一種常見的中老年人進(jìn)行性神經(jīng)變性性疾病，60歲以上老年人的發(fā)病率為1-2％。關(guān)于 PD的病因和發(fā)病機(jī)制，目前認(rèn)為是在遺傳易感性和年齡老化的基礎(chǔ)上由于接觸環(huán)境因素所致。研究提示線粒體KATP離子通道的開放可能能夠減輕某些神經(jīng)疾病的神經(jīng)細(xì)胞的調(diào)亡，從而對(duì)這些神經(jīng)變性性疾病有治療作用，二氮嗪（diazoxide）作為一種線粒體KATP通道開放劑，在腦缺血時(shí)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用已經(jīng)明確，

2、本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)魚藤酮建立帕金森病模型研究線粒體KATP通道開放對(duì)PC12細(xì)胞的保護(hù)作用。 目的：利用魚藤酮建立帕金森病的PC12細(xì)胞模型，并使用線粒體KATP通道的開放劑二氮嗪和二氮嗪的拮抗劑5-羥葵酸，研究線粒體KATP通道的開放對(duì)于魚藤酮誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用并初步探討其機(jī)制。 材料與方法：PC12細(xì)胞經(jīng)過(guò)神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)為多巴胺能細(xì)胞，加入魚藤酮24h，通過(guò)四甲基偶氮唑鹽（MTT 法）檢測(cè)法確定合適的魚藤酮濃度并

3、根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室以前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，作用于細(xì)胞后，經(jīng)用流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡；選取合適的魚藤酮濃度后，加入不同濃度的線粒體KATP通道的開放劑二氮嗪和阻斷劑5-羥葵酸作用不同時(shí)間，用MTT，流式細(xì)胞儀，JC-1，熒光顯微鏡等檢測(cè)細(xì)胞凋亡，線粒體膜電位和細(xì)胞內(nèi)蛋白聚集等的變化。 結(jié)果：魚藤酮可使多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞出現(xiàn)凋亡，使細(xì)胞線粒體膜電位發(fā)生去極化改變從而降低線粒體膜的穩(wěn)定性，還可引起細(xì)胞內(nèi)蛋白的聚集；加入魚藤酮的同時(shí)也加入

4、線粒體KATP通道開放劑后，能夠減少PC12細(xì)胞的凋亡，并穩(wěn)定線粒體膜電位。而同時(shí)加入線粒體KATP通道開放后的阻斷劑5-HD的PC12細(xì)胞凋亡率與魚藤酮處理相比無(wú)變化。 結(jié)論：成功建立了魚藤酮誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的帕金森病細(xì)胞模型，魚藤酮可引起多巴胺能神經(jīng)元的凋亡，并與魚藤酮的作用濃度呈正比，同時(shí)，魚藤酮可使細(xì)胞線粒體膜電位發(fā)生改變，提示魚藤酮使細(xì)胞線粒體受損是其毒性作用的一個(gè)機(jī)制。線粒體KATP通道開放劑二氮嗪能夠拮抗魚藤