甲地海因溶液和人工硬腦膜預(yù)防脊髓及神經(jīng)根粘連的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:本課題旨在通過建立動(dòng)物模型,研究甲地海因溶液和人工硬腦膜對(duì)脊髓栓系松解術(shù)后硬脊膜內(nèi)脊髓、神經(jīng)根粘連的預(yù)防作用,為探索臨床應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法:1.將60只雌性Wistar大鼠體重230-270克,按體重隨機(jī)分為4組:甲地海因溶液組(A)、人工硬腦膜組(B)、甲地海因溶液+人工硬腦膜組(C)、生理鹽水對(duì)照組(D);2.全部動(dòng)物先分別行恥骨上膀胱造瘺,術(shù)后1周行尿流動(dòng)力學(xué)和肌電圖檢查;檢查結(jié)束后2-3天行二次手術(shù),以

2、L3為中心,依次切開各層,硬脊膜開窗約0.3cm×0.1cm大小;A組在缺損處涂布甲地海因溶液0.5ml,B組覆蓋人工硬腦膜,C組覆蓋侵泡甲地海因溶液的人工硬腦膜,D組涂布生理鹽水0.5ml。各組隨機(jī)選取5只大鼠分別于第二次術(shù)后1周,4周,8周進(jìn)行尿流動(dòng)力學(xué)和肌電圖檢查,然后處死大鼠,依次打開各層,按照Rydell分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),觀察硬脊膜內(nèi)脊髓、神經(jīng)根粘連情況;分別取出整塊L2-L4節(jié)段脊柱標(biāo)本,行常規(guī)脫鈣、脫水、透明及石蠟包埋,5um連續(xù)

3、切片,HE染色,根據(jù)改良Nussbaum組織學(xué)評(píng)分,光鏡下觀察硬脊膜內(nèi)粘連情況,所有大鼠依據(jù)Tarlov評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)后肢行為學(xué)功能評(píng)價(jià)。各處理組與對(duì)照組比較采用方差分析,P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:1.大體標(biāo)本觀察:二次術(shù)后1周,各組硬膜內(nèi)可見稀疏而散在的膜性粘連,瘢痕組織與硬膜囊易鈍性分離,硬膜囊光滑、完整,Rydell分級(jí)主要為0～Ⅰ級(jí),各組間相比無顯著性差異(P＞0.05,表1)。4周時(shí),D組硬膜內(nèi)瘢痕組織

4、致密,粘連廣泛,瘢痕組織與硬膜囊不易鈍性分離,分離后硬膜囊多完整,Rydell評(píng)分集中在Ⅰ～Ⅱ級(jí);A、B、C組評(píng)分主要為0～Ⅰ級(jí),與D組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);A組與B、C組之間,B組與C組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。8周時(shí),D組硬膜內(nèi)瘢痕組織致密,粘連廣泛,瘢痕組織與硬膜囊不易鈍性分離,分離后硬膜囊難以保持完整,Rydell分級(jí)主要為Ⅱ～Ⅲ級(jí);A、B、C組相比粘連程度較輕,B、C組與D組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜

5、0.05);但A組與D組,B組與C組之間相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2.病理切片HE染色觀察:光鏡下觀察,二次術(shù)后1周時(shí),脊髓粘連面積＜25％,脊髓外膠原稀疏,瘢痕和移植物無明顯側(cè)方及后方延伸,各組Nussbaum組織學(xué)評(píng)分均為0級(jí)(見圖1),相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05,表2)。4周時(shí),D組脊髓粘連面積25％～50％,硬脊膜內(nèi)脊髓、神經(jīng)根粘連,膠原較致密,瘢痕側(cè)方延伸達(dá)脊髓與椎板缺損之間,或部分嵌入椎板缺損

6、,但未壓迫脊髓,評(píng)分為Ⅰ級(jí)(見圖2),A、B、C組粘連程度較輕,與D組有顯著性差異(P＜0.05);A組與B、C組,B與C組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。8周時(shí),脊髓粘連面積＞50％,脊髓外膠原致密,瘢痕包繞或伸達(dá)一側(cè)或雙側(cè)神經(jīng)根,或瘢痕嵌入椎管,脊髓受壓變形,硬脊膜內(nèi)脊髓、神經(jīng)根粘連,評(píng)分為Ⅱ級(jí)(見圖3),B、C組與D組相比粘連程度較輕,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);A組與B、C組,B與C組之間亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

7、
　　 3.后肢行為學(xué)功能評(píng)價(jià):一次術(shù)后1周,所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行走未見明顯異常,評(píng)分為5級(jí);二次術(shù)后1周,各組大鼠Tarlov評(píng)分為4～5級(jí),各組之間相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05,表3)。術(shù)后4周,各組均出現(xiàn)不同程度的癱瘓,后肢活動(dòng)頻繁或有力,不能負(fù)重,Tarlov評(píng)分為2～3級(jí),A、B、C組癱瘓程度與D組相比程度較輕,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);A組與B、C組,B組與C組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。8周時(shí),D組

8、大鼠肌力的下降呈進(jìn)行性加重的趨勢(shì),嚴(yán)重癱瘓,后肢可見輕微活動(dòng)但不能做類似爬行的動(dòng)作,且伴有潰瘍,Tarlov評(píng)分為1～2級(jí),A、B、C組與D組相比癱瘓程度輕,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);A組與B、C組,B、C組之間差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4.尿流動(dòng)力學(xué)研究:第一次術(shù)后,比較各組之間的膀胱容量,逼尿肌壓及順應(yīng)性,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05,表4)。二次術(shù)后第1周,膀胱容量增加,順應(yīng)性降低,逼尿肌壓力增

9、加,各組與術(shù)前,各組間相比無顯著差異(P＞0.05)。術(shù)后4周時(shí),D組與A、B、C組相比,膀胱容量增加明顯,順應(yīng)性降低,逼尿肌壓力增加,有顯著性差異(P＜0.05),A組與B、C組,B組與C組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。二次術(shù)后第8周,A、B、C組與D組相比存在顯著性差異(P＜0.05);A組與B、C組,B組與C組相比差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 5.體感誘發(fā)電位研究:第一次術(shù)后各組N17潛伏期,P40波

10、幅無顯著差異(P＞0.05,表5)。二次術(shù)后1周時(shí)各組與術(shù)前相比,N17潛伏期延長,P40波的波幅降低,有顯著差異(P＜0.05),各組間相比無顯著差異(P＞0.05)。4周時(shí),A、B、C組與D組存在顯著性差異(P＜0.05);A組與B、C組,B組與C組相比差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。術(shù)后8周,A、B、C組與D組存在顯著性差異(P＜0.05),A組與B、C組相比差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),B組與C組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜