褪黑激素促進鹿茸間充質細胞增殖的作用機制研究.pdf

1、鹿茸是一種能夠周期性再生的器官，在我國一般特指梅花鹿和馬鹿還未骨化的嫩角，具有很高的藥用價值。褪黑激素（MLT）是一種主要由松果體分泌的吲哚類內分泌激素，在調節(jié)季節(jié)性繁殖動物的生理周期過程中發(fā)揮重要作用。已有研究表明，MLT能影響鹿茸的生長周期，其受體MT1在鹿茸頂端增殖區(qū)中高效表達，且MT1基因與鹿茸的產量密切相關。然而，MLT促進鹿茸間充質細胞增殖的機制尚不清楚。本課題以梅花鹿鹿茸間充質細胞作為研究對象，利用RNA干擾等手段對以上問

2、題予以探究。本研究的結果將深入了解MLT促進鹿茸間充質細胞增殖的機制，同時為提高梅花鹿鹿茸產量提供思路。主要研究內容和結果如下:
　　(1)鹿茸間充質細胞轉染GR-2干擾質粒48 h后，與對照組相比，轉染組MT1基因的mRNA表達量下降60.1％;轉染72 h后，蛋白質的表達量下降62.9％。表明干擾效果明顯。
　　(2) MTT法檢測細胞增殖結果顯示，MT1干擾組細胞存活率顯著降低，MLT組(800 pg/mL)細胞存活率

3、顯著上升，說明干擾MT1后能顯著抑制細胞增殖。
　　(3) PI染色后用流式細胞儀檢測細胞周期的結果顯示，MLT組S期高于對照組，差異顯著;與對照組相比，MT1組的G2/M期細胞比例顯著降低。
　　(4) qRT-PCR檢測結果顯示，干擾MT1后，IGF-1及其受體IGF-1R表達量均顯著降低;而MLT(800 pg/mL)處理后，IGF-1表達量顯著提高，其受體IGF-1R表達量也顯著提高。進一步用ELISA檢測細胞上清中