臍帶血細胞移植修復消化道粘膜及內(nèi)鏡檢查醫(yī)源性損傷機制的基礎研究.pdf

1、一、目前，臨床缺乏治療炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease，IBD)的有效手段。臍血是目前最理想、方便的干細胞移植的供體來源之一。本文在免疫活性細胞移植誘導SCID鼠結腸炎模型上，移植臍血單個核細胞(CBMNS)后觀察病變腸道的變化，在此基礎上嘗試探討干細胞移植治療IBD的作用機制。同時對收集到的近十余年接受手術治療IBD患者腸道標本進行了回顧性研究。 經(jīng)組化染色發(fā)現(xiàn)，IBD患者病變腸道粘膜內(nèi)大量炎癥

2、細胞浸潤的同時調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)比例相對降低。SCID鼠在移植BALB/C鼠CD4+CD25-T細胞后3-5w表現(xiàn)出明顯消耗性癥狀，腸道病理改變類似人類疾病的變化。移植CM-DiI熒光標記后的hCBMNS對模型鼠疾病活動指數(shù)(DAI)的觀察發(fā)現(xiàn)移植組一般狀況改善，移植5w后腸道病理檢測顯示組織學評分降低，熒光示蹤發(fā)現(xiàn)移植細胞分布于腸粘膜淋巴組織內(nèi)和腺上皮細胞間，提示其可能參與了結腸道粘膜的修復過程。進一步的體外研究表明，間充質(zhì)干細

3、胞(MSC)能有效抑制小鼠淋巴細胞的活化增殖，提示免疫調(diào)節(jié)作用可能是其治療作用的重要機制之一。 上述研究結果提示，IBD患者腸粘膜內(nèi)的確存在Treg相對不足的現(xiàn)象。實驗數(shù)據(jù)表明移植CBMNS可能改善IBD腸道病變，MSC可能在其中起到一定的治療作用。 二、SCID鼠色素內(nèi)鏡(染色內(nèi)鏡，chromoendoscopy)檢查，需要借助活體染色劑提高對粘膜早期病變的檢出率，但作為一種新興技術，由于其開展較晚，對于其醫(yī)源性損傷(

4、iatrogenic)的研究十分少見。雖然一般認為在臨床染色所用濃度的活體染色劑對機體的影響不大，但弄清其對機體細胞究竟存在損傷與否是臨床上亟待回答、也是不能回避的問題。 采用臨床常用的內(nèi)鏡活體染料美藍(MB，Methylene blue)和靛胭脂(IC，indigo carmine)對待測的細胞染色，探討經(jīng)冷光源照射后的細胞DNA損傷情況，并嘗試明確其損傷的發(fā)生機制和作用規(guī)律。應用單細胞凝膠電泳技術(comet assay)檢

5、測經(jīng)冷光源照射后的待測染色細胞，用CASP軟件分析DNA損傷情況。結果顯示經(jīng)光照后胃癌細胞系SGC7901 MB組細胞DNA損傷程度明顯高于不照射組、IC照射或不照射組和對照的未經(jīng)染色單純照射組，在原代培養(yǎng)的干細胞和原代細胞上也得到類似結果。進一步研究表明該損傷嚴重程度與光照時間相關，光照停止后相應損傷得到一定程度修復。運用Annexin V-FITC/PI雙染法經(jīng)流式細胞儀(FACS)觀察發(fā)現(xiàn)這一過程伴隨有細胞凋亡現(xiàn)象。選用熒光探針D

6、CFH-DA進行細胞內(nèi)活性氧(ROS，Reactive Oxygenspecies)檢測，發(fā)現(xiàn)染色組經(jīng)照射后細胞內(nèi)ROS顯著升高。對管家基因進行PCR未發(fā)現(xiàn)DNA損傷位點分布差異。 研究結果表明：MB確實造成被染色細胞的DNA損傷，并可以誘發(fā)細胞凋亡，其作用機制與光化學反應激發(fā)產(chǎn)生的過量ROS有關。由于在癌前病變組織中DNA損傷與基因突變和惡變關系十分緊密，因此應盡量減少對特定人群的MB染色檢查以防止造成進一步的醫(yī)源性DNA損傷