DEK蛋白與端粒酶相互作用的研究.pdf

1、目的：DEK蛋白是一種染色質(zhì)架構(gòu)蛋白，宮頸癌中DEK蛋白的水平明顯高于正常子宮頸細胞，在多種腫瘤中也表現(xiàn)出特異性的過表達，近年來其受到了極大的關(guān)注。隨著研究的深入，DEK蛋白的研究正一步步的深入，但有關(guān)其作用機理仍不十分清楚。我們希望通過研究DEK蛋白與在腫瘤中人們關(guān)注較多的端粒酶的關(guān)系，來進一步揭示DEK蛋白在腫瘤中的作用機制。
　　方法：我們選取了Hela細胞系作為研究對象，利用pcDNA3.1構(gòu)建了帶有His標(biāo)簽的pcDNA

2、3.1-DEK的真核表達載體，并利用Roche公司的FuGENE HD將其轉(zhuǎn)染到Hela細胞中；同時通過公司合成了針對DEK癌基因的shRNA載體，其分別可以在細胞內(nèi)表達不同的siRNA，針對DEK癌基因進行基因沉默。
　　在轉(zhuǎn)染實驗條件確定的基礎(chǔ)上，我們利用Western Blot與免疫組織化學(xué)檢測了處理后細胞的DEK蛋白水平，并利用TRAP-PCR試劑盒檢測了端粒酶的活性。同時采用熒光定量PCR的方法，檢測了DEK基因與hTE

3、RT基因的mRNA水平，以期確定這兩者的關(guān)系。同時檢測了p53基因和MCL-1基因的表達情況，希望揭示這兩個腫瘤相關(guān)基因與DEK蛋白及端粒酶的內(nèi)在聯(lián)系。
　　結(jié)果：通過Western Blot和免疫組織化學(xué)成功檢測到DEK蛋白在Hela細胞內(nèi)的過量表達，同時，檢測到轉(zhuǎn)染shRNA載體后DEK蛋白在Hela細胞中的降低。端粒酶活性檢測未能看到Hela細胞內(nèi)明顯的端粒酶活性。通過熒光定量PCR，可以看到DEK升高時，hTERT與p53