Hes1-Hes5基因?qū)m頸癌細胞分化的調(diào)節(jié)作用及其信號途徑的研究.pdf

1、研究背景宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤,次于乳腺癌,且近年來有上升趨勢;死亡率居女性癌癥死亡的第二位,是當今嚴重威脅婦女健康的主要疾病之一.宮頸癌發(fā)病的首要因素是高危型HPV(HR-HPV)感染,HR-HPV DNA通過表達病毒致癌蛋白E6、E7,引起宿主細胞的異常增殖和永生化,最終導致宮頸癌發(fā)生.但在正常細胞向腫瘤細胞的轉(zhuǎn)化過程中,僅有細胞的異常增殖是不夠的,細胞去分化也是癌變過程的關(guān)鍵步驟;因此越來越多的研究者將關(guān)注點集中在腫瘤發(fā)生過程

2、中細胞分化程度的改變.宮頸癌的發(fā)生是一個比較緩慢的過程,整個轉(zhuǎn)化過程常需要數(shù)年至數(shù)十年之久;這使得宮頸癌的早期診斷早期治療成為可能.對于早期宮頸癌患者,尤其是年輕患者應(yīng)以手術(shù)治療作為主要的治療方法.手術(shù)治療可以發(fā)現(xiàn)確切影響預(yù)后的臨床病理因素,從而使得輔助治療更加有的放矢.在眾多的預(yù)后影響因素中,腫瘤細胞分化是最本質(zhì)的因素.因此,揭示在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中引起腫瘤細胞分化改變的分子機制對宮頸癌防治有重要意義. 本研究首先檢測正常

3、宮頸上皮、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN) 以及宮頸鱗狀細胞癌(SCC)細胞中分化相關(guān)蛋白 Hesl、Hes5的表達情況,并分析其與早期宮頸癌預(yù)后相關(guān)因素的關(guān)系,以探討 Hesl/Hes5蛋白的表達在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展的作用;然后應(yīng)用RNA干擾技術(shù)分別沉默宮頸鱗癌細胞株 (Sila 細胞)中的 Hes-1及Hes-5基因,觀察干擾后SiHa細胞中 Hes-1/Hes-5的表達及其上、下游蛋白及與細胞分化、增殖相關(guān)指標的改變,并探討 Hesl/H

4、es5以及Notch-Hes信號途徑與宮頸癌細胞分化、增殖的關(guān)系;旨在闡明 Hes-1/Hes-5基因及其信號途徑在宮頸癌細胞分化中的調(diào)節(jié)作用,并尋找能阻斷抑制宿主細胞分化的關(guān)鍵分了,為探索宮頸癌防治新策略和新靶點提供實驗依據(jù). 第一部分:Hes1/Hes5蛋白在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌組織中的表達研究 目的:分別檢測正常宮頸上皮、宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗狀細胞癌中分化相關(guān)蛋白Hes1及Hes5的表達水平,初步探討Hes1/

5、Hes5蛋白的表達與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系. 材料和方法:選取2004年10月至2005年6月在浙江大學醫(yī)學院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院病理科存檔的宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗狀細胞癌絹.織,包括輕度宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINI)31例,中一重度宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅡ-Ⅲ)77例,宮頸鱗狀細胞癌(SCC)109例,其中高分化26例,中分化50例及低分化33例.所有病人取標本前均未接受過放、化療及免疫治療.在109例SCC病人中,73例早期宮

6、頸癌(包括la期10例,Ⅰb期59例,Ⅱa期4例)接受了手術(shù)治療,具有完整的臨床病理資料,包括(1)病人年齡, (2)臨床分期, (3)腫瘤細胞分化, (4)腫瘤大小, (5)間質(zhì)浸潤深度,(6)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及(7)宮旁淋巴血管侵犯情況等.選擇同期在浙江人學醫(yī)學院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院病理科存檔的因子寓肌瘤進行全子宮切除、經(jīng)病理確診無宮頸病變的78例正常宮頸鱗狀上皮組織作為正常對照.通過免疫組織化學的方法檢測Hes1、Hes5蛋白的表達情況.

7、 結(jié)論 1.Hes1/Hes5蛋白過表達可能參與宮頸鱗狀上皮的癌變過程; 2.Hes1/Hes5蛋白的過表達有望成為預(yù)測早期宮頸癌不良預(yù)后因素的標志. 第二部分: Hes1/Hes5基因?qū)m頸癌細胞分化、增殖的調(diào)節(jié)作用 研究目的:探討宮頸癌細胞中Hes1/Hes5基因及Notch-Hes途徑對宮頸癌細胞分化、增殖的影響,從而明確分化相關(guān)基因Hes1/Hes5對宮頸癌細胞分化、增殖的調(diào)節(jié)作用.

8、 材料和方法:通過RNA干擾(RNAi)技術(shù)分別沉默SiHa細胞中Hes1/Hes5基因,免疫細胞化學、免疫印跡檢測干擾后SiHa細胞Hes1/Hes5上下游蛋白以及分化、增殖相關(guān)蛋白的改變;MTT法檢測細胞增殖力的改變. 結(jié)論: 1.通過RNA干擾能成功沉默宮頸癌細胞中的Hes1/Hes5基因; 2.Hes1/Hes5基因抑制宮頸癌細胞分化,Hash1蛋白參與了這一抑制過程的信號轉(zhuǎn)導; 3.下調(diào)Hes