硒通過microRNA155調(diào)控金黃色葡萄球菌性乳腺炎發(fā)生的作用機制研究.pdf

1、硒在被發(fā)現(xiàn)的前期被認(rèn)為是一種有毒物質(zhì)，但隨著研究的深入和科技的發(fā)展發(fā)現(xiàn)硒是多種生物體所必需的微量營養(yǎng)物質(zhì)，對人體及多種動物器官的發(fā)育及生理功能的作用不可替代，硒缺乏會降低谷胱甘肽過氧化物酶的活性，進而使自身的抗氧化能力減弱，體內(nèi)累積大量的過氧化物和脂質(zhì)自由基會破壞細胞和損傷組織，同時降低組織的免疫能力。硒補充與全身炎癥反應(yīng)綜合征和敗血癥的治愈有關(guān)，體內(nèi)營養(yǎng)硒攝入充分的個人，具有顯著的免疫刺激效應(yīng)，可以增強活化和促進增殖T細胞，增加NK細

2、胞活性。乳腺炎是奶牛常發(fā)的乳腺組織炎癥性疾病，多發(fā)生于奶牛泌乳期。臨床上乳腺炎的主要致病菌是金黃色葡萄球菌，引發(fā)乳房紅腫，降低產(chǎn)奶量，嚴(yán)重感染時會導(dǎo)致奶牛全身性炎癥損傷。MicroRNA-155(miR-155)是一種典型的多生物學(xué)功能性miRNA分子，miR-155能影響造血細胞的分化，并在炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。炎癥刺激后miR-155在生物體內(nèi)表達上調(diào)，還可被TLRs通過MyD88依賴性通路誘導(dǎo)，后經(jīng)NF-κB和JNK/

3、MAPK途徑調(diào)控炎癥反應(yīng)。但目前關(guān)于硒通過miR-155調(diào)控金葡菌誘導(dǎo)的細胞因子及TLR2表達進而抑制NF-κB和MAPK的活化而減輕炎癥反應(yīng)的發(fā)生機制還尚不了解。
　　本試驗體內(nèi)實驗部分通過飼喂SPF級BALB/c小鼠缺硒鼠糧、正常硒鼠糧、高硒鼠糧60天，待雌鼠分娩5～7d后經(jīng)乳導(dǎo)管灌注金葡菌重懸液建立小鼠乳腺炎癥模型，研究硒對金葡菌性乳腺炎癥反應(yīng)的影響。經(jīng)乳腺組織硒含量檢測、乳腺病理組織學(xué)觀察、MPO活性檢測、miR-155及

4、細胞因子和TLR1，2，6的表達分析，研究不同日糧硒水平對金葡菌誘導(dǎo)的小鼠乳腺炎癥反應(yīng)的影響。結(jié)果顯示，攝入不同日糧硒會影響乳腺組織硒含量，病理組織學(xué)分析表明金葡菌感染后缺硒小鼠乳腺有大量炎性細胞浸潤，腺泡結(jié)構(gòu)被破壞，而高硒小鼠乳腺結(jié)構(gòu)較完整。并且qPCR和ELISA檢測結(jié)果表明缺硒小鼠乳腺組織中miR-155和促炎因子表達水平顯著高于正常硒含量小鼠。這些結(jié)果說明缺硒日糧促進金葡菌誘導(dǎo)的小鼠乳腺炎癥反應(yīng)，而補硒可以顯著抑制TLR2表達，

5、同時抑制其下游NF-κB和MAPK炎癥信號通路中蛋白磷酸化來降低促炎因子的產(chǎn)生，促進乳腺組織的炎性修復(fù)功能。
　　然后為了進一步確證體內(nèi)實驗結(jié)果，我們分離培養(yǎng)了原代小鼠乳腺上皮細胞(MMECs)并進行體外實驗。MMECs經(jīng)CK-18鑒定合格及MTT活性檢測后進行miR-155-5p mimics轉(zhuǎn)染，然后用含不同硒濃度的Opti-MEM培養(yǎng)12h再添加金葡菌懸液構(gòu)建細胞模型，同時設(shè)立未轉(zhuǎn)染miR-155 mimics對照組。qPC