腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎及血清與滑膜中TNF-α、HIF-1α和VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、目的：類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種慢性進(jìn)行性自身免疫性疾病，以關(guān)節(jié)滑膜炎，對(duì)稱(chēng)性和破壞性關(guān)節(jié)病變?yōu)橹饕卣?。其病因尚不完全明確，多種免疫活性細(xì)胞的活化、細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)的共同參與、滑膜血管翳的發(fā)生和生長(zhǎng)，是RA發(fā)生和發(fā)展的中心環(huán)節(jié)。并且促進(jìn)了軟骨和骨的破壞及關(guān)節(jié)重塑，最終造成關(guān)節(jié)畸形和強(qiáng)直，功能喪失。在細(xì)胞因子相互作用的網(wǎng)絡(luò)中腫瘤壞死因子-α[(tumornecrosis factor alph

2、a，,TNF-α)居于中心位置，是RA滑膜炎發(fā)生和持續(xù)的一個(gè)關(guān)鍵性因子。目前，改善癥狀的抗風(fēng)濕藥是RA的主要治療手段，由于傳統(tǒng)抗風(fēng)濕藥的毒副作用較大，因此，患者長(zhǎng)期服用依從性差，不利于疾病控制。可溶性重組人腫瘤壞死因子受體.抗體融合蛋白(rhu-TNFR-Fc，益賽普)，是一種拮抗TNF-α的生物制劑，目前已應(yīng)用于臨床：治療效果優(yōu)于傳統(tǒng)的抗風(fēng)濕藥。但國(guó)內(nèi)對(duì)于益賽普能否抑制促進(jìn)血管增生的細(xì)胞因子的分泌罕有報(bào)道。本試驗(yàn)以佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠

3、模型為基礎(chǔ)，從關(guān)節(jié)腫脹程度，血漿與滑膜組織中TNF-α及滑膜組織中缺氧誘導(dǎo)因子.1α[(hypoxia-inducible factor-1αHIF-1α)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growthfactor，VEGF)濃度的變化，滑膜病理改變等幾方面，觀察益賽普對(duì)關(guān)節(jié)炎的影響，評(píng)價(jià)其療效，探討益賽普治療RA的機(jī)制及臨床應(yīng)用價(jià)值。 方法：(1)將成年雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為I組(正常對(duì)照組)

4、、II組(單純?cè)炷＝M)、III組(造模+甲氨喋呤治療組)、Ⅳ組(造模+益賽普低劑量治療組)、V組(造模+益賽普高劑量治療組)。II～V組的尾根部皮下注射完全弗氏佐劑與卡介苗的乳化劑，誘導(dǎo)出關(guān)節(jié)炎模型。(2)從免疫后第12天開(kāi)始III組給予甲氨喋呤2.7mg/kg.w灌胃治療，Ⅳ組給予益賽普0.44mg/kg.d皮下注射，V組給予益賽普0.88mg/kg.d皮下注射治療。(3)每三天測(cè)量各組大鼠的足體積(排水法)，并進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)定。(

5、4)采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定第28天各組大鼠血漿TNF-α濃度。(5)對(duì)各組大鼠滑膜組織進(jìn)行TNF-α、VEGF、HIF-1α的sp免疫組織化學(xué)染色，采用真彩病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析。(6)觀察各組大鼠滑膜組織病理改變，并進(jìn)行病理積分評(píng)定。(7)應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果：(1)關(guān)節(jié)炎指數(shù)(Arthritis Index，AI)，：第Ⅱ組大鼠造模后各時(shí)間點(diǎn)AI均高于第1組(P＜0.01)，高峰出

6、現(xiàn)在造模后21～27天；V組于造模后18～27天AI低于第Ⅱ組(P＜0.05、)；而III、Ⅳ、V組間AI無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(2)足體積：第Ⅱ組大鼠造模后15天右后足體積高于第1組(P＜0.05)，第21～24天腫脹達(dá)到高峰，之后下降，第27天仍高于正常對(duì)照組(P＜0.01)；III、Ⅳ、V組于造模后第18～27天高于第1組(P＜0.05)；第Ⅳ組于第21～24天低于第Ⅱ組(P＜0.05)，后漸升高，第27天與第Ⅱ組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；第V組于造

7、模后第21～27天低于第Ⅱ組(P＜0.01)。(3)血漿TNF-α濃度：第Ⅱ、Ⅳ、V組血漿TNF-α水平均高于第1組(P＜0.05)；第Ⅰ、III組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；第Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組均低于第Ⅱ組(P＜0.01)；第Ⅳ組高于第Ⅲ組(P＜0.01)；第Ⅴ組與第Ⅲ組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(4)滑膜TNF-α、HIF-1α和VEGF的積分光密度(IOD)值及滑膜病理評(píng)分：①第Ⅱ組均顯著高于第Ⅰ組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；②滑TNF-α的IOD值，Ⅳ、Ⅴ組均低于Ⅱ組，Ⅴ

8、組低于Ⅳ組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Ⅲ組明顯高于Ⅳ、V組(P＜0.05)，而與第Ⅱ組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；③滑膜HIF-1α、VEGF的IOD值，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組均低于Ⅱ組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Ⅲ、Ⅳ組均高于Ⅴ組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而Ⅲ與Ⅳ組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；④滑膜病理評(píng)分，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組均低于Ⅱ組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Ⅲ組明顯高于Ⅴ組(P＜0.05)，而Ⅲ、Ⅴ組與Ⅳ組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(5)相關(guān)性分析：AI與足體積成直線正相關(guān)；血漿TNF-α及滑膜中TNF-α、HIF-1α和VEGF水

9、平分別成直線正相關(guān)，同時(shí)二者分別與足體積、病理積分成直線正相關(guān)。 結(jié)論：(1)益賽普對(duì)AA大鼠的關(guān)節(jié)炎癥有明顯的治療作用，可以降低AA大鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)、足體積，減輕足腫脹程度。(2)益賽普可以有效抑制或延緩AA大鼠滑膜組織病理改變，可能能夠控制病情進(jìn)展。(3)對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)炎的治療，益賽普高劑量的療效優(yōu)于MTX，低劑量與MTX相當(dāng)，且對(duì)關(guān)節(jié)炎癥的治療作用存在劑量依賴(lài)性。(4)益賽普可降低AA大鼠血漿TNF-α的水平。(5)益賽普