電針對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎滑膜HIF-1α和VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、目的:膝骨關(guān)節(jié)炎(knee osteoarthritis，KOA)是一種以關(guān)節(jié)退行性病變?yōu)橹饕淖兊某Ｒ?jiàn)老年慢性骨關(guān)節(jié)疾病。據(jù)研究表明，膝關(guān)節(jié)處于生理性的低氧環(huán)境。在低氧環(huán)境中，缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia-inducible factor-1，HIF-1)有著重要調(diào)節(jié)功能并在缺氧狀態(tài)下發(fā)揮作用，它是一種核轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)控其他基因轉(zhuǎn)錄，同時(shí)也是一種DNA結(jié)合蛋白。HIF-1α和HIF-1β是構(gòu)成HIF-1的兩個(gè)亞基，前者是HIF-1

2、中調(diào)節(jié)缺氧特有的調(diào)控亞基。HIF-1α在關(guān)節(jié)處于嚴(yán)重缺氧環(huán)境時(shí)，表達(dá)增多發(fā)生累積，并由細(xì)胞漿內(nèi)轉(zhuǎn)移至核內(nèi)，與其重要的靶基因血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的DNA結(jié)合，導(dǎo)致其表達(dá)增高。隨著近年來(lái)研究的不斷深入，慢性滑膜炎繼軟骨及軟骨下骨的研究之后成為KOA發(fā)病機(jī)制的研究熱點(diǎn)。手術(shù)治療和非手術(shù)治療是KOA主要的兩大類治療方法，其中電針治療是臨床上運(yùn)用較多的一種非手術(shù)治療方法

3、。電針治療將傳統(tǒng)的針灸與電刺激結(jié)合起來(lái)，針灸可刺激KOA患者穴位，促進(jìn)機(jī)體釋放鎮(zhèn)痛物質(zhì)，而電流通過(guò)針刺可使肌肉收縮，調(diào)整肌張力，改善局部的血液循環(huán)，促進(jìn)損傷的修復(fù)。因此，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用電針治療KOA的動(dòng)物模型，通過(guò)肉眼和HE染色觀察滑膜及軟骨標(biāo)本形態(tài)變化和病理改變，免疫組化方法比較治療前后HIF-1α、VEGF的表達(dá)變化，在細(xì)胞和分子層面上初步探討運(yùn)用電針治療兔KOA的療效及可能的作用機(jī)制。
　　方法:(1)材料和干預(yù)措施:雄性新西蘭

4、大白兔35只（5只備用），30只隨機(jī)分為三組，對(duì)照組10只，不作任何處理，模型組和電針組各10只，參照Videman法用石膏將左后肢膝關(guān)節(jié)于伸直位固定，建立兔KOA模型。電針組于造模6周后，選取兔左下肢四個(gè)穴位即足三里、梁丘、陽(yáng)陵泉、血海，于每天同一時(shí)間給予電針治療，治療時(shí)間為30分鐘，持續(xù)治療15天，其余兩組于每天相同時(shí)間固定30分鐘。15天后空氣栓塞法處死三組動(dòng)物，手術(shù)切開左膝關(guān)節(jié)進(jìn)行大體觀察，再以手術(shù)刀片切取關(guān)節(jié)滑膜，制作切片。給

5、予HE染色、免疫組化檢測(cè)和光鏡觀察。按滑膜病理學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，將所得評(píng)分和檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。(2)觀察指標(biāo):①大體觀察三組實(shí)驗(yàn)兔的左膝關(guān)節(jié)形態(tài)改變;②將兔左膝關(guān)節(jié)滑膜切取少許后，經(jīng)固定、包埋、切片，染色后觀察有無(wú)增生的滑膜細(xì)胞、纖維組織和血管，滑膜下層炎癥程度情況，并按照滑膜病理學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)三組標(biāo)本進(jìn)行評(píng)分。③免疫組織化學(xué)分析:用免疫組化試劑盒檢測(cè)各組實(shí)驗(yàn)兔關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞中HIF-1α和VEGF的表達(dá)情況，并在光鏡下進(jìn)行觀察。(3)

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件采用IBM SPSS Statistics19.0，所得計(jì)量數(shù)值采用(x)±s表示，多組之間比較采用單因素方差分析，兩兩比較選用LSD-t檢驗(yàn)，等級(jí)資料用秩和檢驗(yàn)，相關(guān)性用直線相關(guān)分析，P＜0.05為差異具有顯著性意義。
　　結(jié)果:(1)各組膝關(guān)節(jié)大體觀察:對(duì)照組，左膝關(guān)節(jié)沒(méi)有出現(xiàn)充血及腫脹，關(guān)節(jié)液無(wú)渾濁，滑膜質(zhì)地均勻，無(wú)增厚、水腫，關(guān)節(jié)軟骨色澤半透明光滑;模型組9只兔關(guān)節(jié)腫脹、明顯充血，關(guān)節(jié)液出現(xiàn)淡黃色

7、渾濁改變，滑膜增厚明顯，與股骨粘連，軟骨光澤度和透明度降低，色澤灰暗，部分軟骨外表有缺損及突起，部分軟骨剝脫，軟骨下骨外露，關(guān)節(jié)面較粗糙;電針組僅3只可見(jiàn)關(guān)節(jié)腔內(nèi)積液，且量較模型組少，部分滑膜表面有少許增厚，滑膜外觀光滑，光澤度較對(duì)照組差但優(yōu)于模型組。(2)滑膜細(xì)胞HE染色病理學(xué)觀察評(píng)分:三組病理學(xué)評(píng)分比較有顯著性差異(P＜0.05)。(3)滑膜免疫組化檢測(cè)結(jié)果:在顯微鏡下，HIF-1α和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色或棕褐色顆粒狀物。對(duì)照

8、組HIF-1α和VEGF呈弱陽(yáng)性表達(dá)，本次實(shí)驗(yàn)鏡下極少見(jiàn)黃褐色顆粒;模型組HIF-1α和VEGF呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，分別于滑膜細(xì)胞，滑膜下層巨噬細(xì)胞、部分血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等表達(dá)，HIF-1α于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)，VEGF于細(xì)胞漿中表達(dá)。電針組HIF-1α表達(dá)較模型組降低，鏡下僅在滑膜細(xì)胞發(fā)現(xiàn)少許淺黃褐色顆粒。三組滑膜HIF-1α和VEGF表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞率及積分光密度值比較有顯著性差異(P＜0.05)，HIF-1α和VEGF表達(dá)呈正