電針對兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨p38表達的影響.pdf

1、 目的：骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)又叫作退行性骨關(guān)節(jié)病,好發(fā)于中老年人,以關(guān)節(jié)軟骨進行性退化變性、軟骨下骨質(zhì)反應(yīng)性變化及關(guān)節(jié)邊緣的骨贅形成為病理特點,是負重關(guān)節(jié)的常見疾病。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases, MAPKs) 是細胞內(nèi)重要的信號傳遞者,參與了多種生理過程的調(diào)節(jié),被認為在OA發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用。軟骨中 p38 絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)

2、 是 MAPKs 中的亞型之一,它在軟骨細胞凋亡、細胞因子產(chǎn)生、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)及缺血再灌注損傷中起重要作用,它參與膠原蛋白網(wǎng)絡(luò)斷裂,蛋白多糖降解,是反映OA病變程度的特異性指標,在正常軟骨中少見,但在OA軟骨中則有明顯升高。針灸能疏通經(jīng)絡(luò)、調(diào)和陰陽, 能促進細胞增殖、蛋白質(zhì)合成、刺激膠原和細胞因子生成,可以促進軟骨、韌帶和肌腱等組織損傷的修復(fù),對OA具有鎮(zhèn)痛、消腫、改善關(guān)節(jié)活動功能的作用。本課題通過觀察電針治療對兔膝OA的軟骨大體形態(tài)變化、軟

3、骨細胞病理改變,以及對軟骨細胞p38表達的影響,探討電針對兔膝OA模型軟骨細胞修復(fù)的影響及作用機制。方法：(1)對象和干預(yù)措施：健康新西蘭大耳兔36只,隨機分為三組,每組12只。正常組12只兔常規(guī)飼養(yǎng),不給予任何干預(yù)措施。模型組12只兔和電針治療組12只兔都采用通過管型石膏將左膝關(guān)節(jié)保持于伸直位制動固定的方法建立本實驗所需OA模型。正常組和模型組在飼養(yǎng)6周后通過耳緣靜脈注入空氣處死,切開左膝關(guān)節(jié),取內(nèi)側(cè)髁軟骨觀察造模后相關(guān)指標變化。治療

4、組12只兔飼養(yǎng)6周后進行電針治療14d,以同樣的方法處死并觀察治療后相同指標改變情況。電針治療采取患膝關(guān)節(jié)“內(nèi)膝眼、外膝眼、陽陵泉、血海、足三里和梁丘”6 個穴位電針治療,電壓6 V , 疏波4HZ,密波20HZ,脈沖寬度0.5ms,輸出強度2 mA ,每天1次,每次電針30 min,連續(xù)治療14d。(2)觀察指標：①觀察三組兔軟骨標本的大體形態(tài)變化；②將軟骨標本制成切片,HE 染色和甲苯胺藍染色,光鏡觀察相關(guān)指標的變化,并且按Mank

5、in’s評分標準進行評分,用抗兔的p38試劑盒檢測左膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)髁軟骨p38含量的表達變化.(3)統(tǒng)計學(xué)處理：用SPSS13.0 for WINDOWS進行統(tǒng)計學(xué)分析。所得數(shù)值結(jié)果采用x ±s表示,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P<0.01有顯著性差異。 結(jié)果：(1)軟骨大體觀察：正常對照組兔左膝關(guān)節(jié)無明顯的關(guān)節(jié)積液,軟骨面外觀光滑呈藍白色,顏色深且明亮,基本無裂紋,軟骨結(jié)構(gòu)Mankin’s評分為0分。模型組左膝關(guān)節(jié)基本上都出現(xiàn)關(guān)節(jié)積

6、液,關(guān)節(jié)面粗糙,甚至部分部位出現(xiàn)糜爛,全部軟骨表面呈灰黃色,光澤度明顯降低,表面略有不平,較粗糙；電針治療組只有部分兔膝關(guān)節(jié)出現(xiàn)關(guān)節(jié)積液及滑膜增生,軟骨改變?nèi)匀灰源植跒橹?但程度較模型組較輕；電針治療組與模型組的軟骨結(jié)構(gòu)按 Mankin’s 評分比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(2)HE染色和甲苯胺藍染色觀察：正常對照組HE染色顯示軟骨表面基本平整,軟骨層的大小勻稱；細胞大小一致,潮線完整性好且甲苯胺藍染色按規(guī)律均勻分布；模型組

7、用HE染色可見軟骨明顯變薄,軟骨表面出現(xiàn)裂隙,軟骨細胞大量簇聚且數(shù)量明顯減少,可見潮線紊亂同時甲苯胺藍染色也顯著變淡；電針治療組光鏡觀察示軟骨細胞分布比較整齊且細胞數(shù)較模型組有所增多,軟骨表面相對平整,裂隙少,軟骨層厚度較模型組厚,也有潮線紊亂,甲苯胺藍染色程度失染較輕。正常對照組與模型組、模型組與電針治療組按Mankin’s評分比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05)。(3)軟骨免疫組化p38測定：正常對照組僅在表層軟骨細胞內(nèi)偶見p

8、38弱陽性表達,為胞漿內(nèi)少量黃褐色顆粒；模型組中軟骨細胞基質(zhì)、胞漿中都有p38表達,全層可見,尤以中層密度最高,成熟軟骨細胞中最多,為深黃褐色顆粒；電針治療組中,軟骨表層可見散在的軟骨細胞胞漿中存在p38表達,為淺黃褐色顆粒。在統(tǒng)計學(xué)上正常對照組與模型組、模型組與電針治療組間比較,差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.01)。 結(jié)論：(1)本研究采取管型石膏將兔左膝關(guān)節(jié)保持于伸直位加壓制動固定的方法制作兔膝OA模型揭示了OA的病理變化,本實