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文檔簡介
1、目的:骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是一種以關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行性退變、破壞以及骨贅形成為特征的慢性骨關(guān)節(jié)病,好發(fā)于膝關(guān)節(jié)、髖關(guān)節(jié)、脊柱以及遠(yuǎn)端指間關(guān)節(jié)等負(fù)重較大的關(guān)節(jié)。臨床可產(chǎn)生關(guān)節(jié)疼痛,活動受限和關(guān)節(jié)畸形等癥狀。膝關(guān)節(jié)是OA最常發(fā)生的部位,研究發(fā)現(xiàn)水通道蛋白3(Aquaporin3,AQP3)能夠推動膝OA的發(fā)展,膝OA患者軟骨細(xì)胞的AQP3表達(dá)明顯高于正常關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞。膝OA作為一種老年進(jìn)行性退化性疾病,目前尚無徹底治愈的
2、手段,主要采取手術(shù)和非手術(shù)治療來延緩病情的進(jìn)展,而電針是一種具有較好臨床療效的非手術(shù)治療方式。目前電針治療膝OA的臨床觀察較多,但以其作為干預(yù)手段進(jìn)行作用機制研究的動物實驗卻比較少見。因此,本課題采用管型石膏伸膝位固定制動法固定6周制作兔膝OA模型,電針干預(yù)4周的治療,來探討電針對兔膝OA發(fā)展及其關(guān)節(jié)軟骨中AQP3表達(dá)的影響以及通過調(diào)控AQP3的表達(dá)來干預(yù)膝OA發(fā)展的可行性,為膝OA的治療尋找新靶點。
方法:(1)預(yù)實驗:瀘州
3、醫(yī)學(xué)院實驗動物中心采購健康新西蘭大白兔5只,雌雄不拘,重量2.3-3.2kg,取右后膝關(guān)節(jié)用管型石膏固定在膝關(guān)節(jié)伸直位,固定范圍從腹股溝平面下1.5cm到踝關(guān)節(jié)下3cm處。制動6周后,手術(shù)刀切取股骨內(nèi)側(cè)髁及脛骨平臺的軟骨組織,進(jìn)行蘇木精-伊紅染色。結(jié)果可見軟骨細(xì)胞排列紊亂、有增生,軟骨表面變薄、有裂隙產(chǎn)生、軟骨組織纖維化,軟骨和滑膜腫脹,有炎細(xì)胞的浸潤,滑膜增生。與骨關(guān)節(jié)炎的病理表現(xiàn)復(fù)合,說明造模成功。(2)對象和干預(yù)措施:瀘州醫(yī)學(xué)院實
4、驗動物中心再次采購健康新西蘭大白兔36只,雌雄不拘,重量2.3-3.2kg,采用隨機數(shù)字表法將36只白兔隨機分成空白對照組、模型組和實驗組,每組各12只??瞻讓φ战M不做任何處理,模型組和電針治療組均造模,6周后,取下石膏管型。模型組造模后不做電針治療,只在電針治療組電針的同時用相同的姿勢綁在治療臺上;電針治療組自取下石膏當(dāng)天開始給予電針治療。取血海、犢鼻、陰陵泉、陽陵泉、足三里、梁丘6穴,接3組電針儀輸出線,輸出頻率為2Hz的疏波,留針
5、20min,每日1次,連續(xù)治療14天。實驗結(jié)束后,采用頸椎脫臼法處死所有兔子,觀察相關(guān)指標(biāo)的變化。(2)指標(biāo)的觀察:①依照改良的Mankin's評分標(biāo)準(zhǔn)對空白對照組、模型組、電針治療組3組兔右后膝關(guān)節(jié)軟骨大體形態(tài)采用肉眼觀察的方法進(jìn)行量化評分;②手術(shù)刀切取空白對照組、模型組、電針治療組3組兔右后膝關(guān)節(jié)的股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨,用10%中性甲醛溶液固定后,再行石蠟包埋和切片,作HE染色,依照改良的Mankin's評分標(biāo)準(zhǔn)對軟骨細(xì)胞的形態(tài)采用光鏡的
6、方法對觀察結(jié)果進(jìn)行量化評分;③酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測膝關(guān)節(jié)液中AQP3表達(dá):用抗兔人AQP3的ELISA試劑盒檢測所采集兔右后膝關(guān)節(jié)液中AQP3的表達(dá)。(3)統(tǒng)計學(xué)處理:采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。所得計量資料結(jié)果采用(x)±s表示,采用t檢驗比較兔軟骨細(xì)胞評分、軟骨結(jié)構(gòu)評分、HE染色評分和潮線完整性評分,以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。<
7、br> 結(jié)果:(1)軟骨大體形態(tài)觀察:空白對照組12只兔右后膝關(guān)節(jié)無關(guān)節(jié)積液,無炎性細(xì)胞的浸潤,軟骨表面光滑、無裂紋,呈藍(lán)白色,色深明亮。軟骨大體形態(tài)的改良Mankin's評分為0分。模型組右后膝關(guān)節(jié)出現(xiàn)明顯關(guān)節(jié)積液,軟骨表面粗糙、有裂紋、光澤度降低,有炎性細(xì)胞的浸潤,軟骨表面呈灰黃色,部分出現(xiàn)糜爛和潰瘍;電針治療組與模型組情況類似,但損害程度較輕,按改良的Mankin's評分比較軟骨結(jié)構(gòu),差異有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。(2) H
8、E染色病理學(xué)觀察:空白對照組示關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞位置排列整齊,細(xì)胞大小相同,潮線完整;軟骨層厚度一致,軟骨表面平坦整齊;模型組軟骨層存在缺損,軟骨層變薄,軟骨細(xì)胞減少明顯,細(xì)胞大量簇聚,潮線紊亂;電針治療組關(guān)節(jié)軟骨表面無明顯缺失,軟骨細(xì)胞排列較模型組整齊,數(shù)量較模型組增多,層厚較模型組增厚,可見潮線紊亂。將空白對照組與模型組、模型組與電針治療組的改良的Mankin's評分結(jié)果進(jìn)行比較,差異均有顯著性意義(P<0.05)。(3)免疫學(xué)ELISA
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