陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥患者骨髓CD34+CD59+與CD34+CD59-細(xì)胞膜G-CSF、SCF受體表達(dá)及受體后STAT5磷酸化水平研究.pdf

1、目的：
　　檢測(cè)陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)患者骨髓CD34+CD59+和CD34+CD59-細(xì)胞粒細(xì)胞集落刺激因子受體(G-CSFR、CD114)、干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(C-KIT、CD117)和胞漿內(nèi)受體后信號(hào)通路蛋白STAT5表達(dá)水平及G-CSF或SCF體外刺激前后STAT5磷酸化(P-STAT5)表達(dá)差異，評(píng)價(jià)PNH患者骨髓CD34+CD59+和CD34+CD59-造血干細(xì)胞膜因子受體功能狀態(tài)及對(duì)細(xì)胞因子刺激的反應(yīng)。<

2、br>　　方法：
　　1.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)26例PNH患者和14名正常對(duì)照者骨髓CD34+CD59+和CD34+CD59-細(xì)胞膜CD114、CD117及胞漿內(nèi)STAT5蛋白的表達(dá)情況。
　　2.26例PNH患者和14名正常對(duì)照者骨髓單個(gè)核細(xì)胞(BMMNC)經(jīng)和不經(jīng)100ng/mlG-CSF、100ng/mlSCF刺激，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)CD34+CD59+和CD34+CD59-細(xì)胞P-STAT5平均熒光強(qiáng)度(MFI)(

3、單位：道數(shù))。
　　結(jié)果：
　　1.①PNH患者骨髓CD34+CD59-細(xì)胞CD114表達(dá)率(43.23±19.77)％，明顯低于CD34+CD59+細(xì)胞(73.72±17.42)％(P<0.01)和正常對(duì)照組CD34+CD59+細(xì)胞(65.91±13.70)％(P<0.01)；而PNH患者CD34+CD59+細(xì)胞與正常對(duì)照組CD34+CD59+細(xì)胞CD114表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　②PNH患者骨

4、髓CD34+CD59-細(xì)胞CD117表達(dá)率(49.20±26.80)％，明顯低于CD34+CD59+細(xì)胞(67.62±17.41)％(P<0.01)和正常對(duì)照組CD34+CD59+細(xì)胞(70.21±12.68)％(P<0.01)；而PNH患者CD34+CD59+細(xì)胞與正常對(duì)照組CD34+CD59+細(xì)胞CD117表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.PNH患者骨髓CD34+CD59-和CD34+CD59+細(xì)胞及正常對(duì)照組

5、CD34+CD59+細(xì)胞STAT5的MFI分別為(270.01±181.26)、(205.05±146.16)及(227.39±156.65)，三組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.①未經(jīng)細(xì)胞因子刺激組，PNH患者CD34+CD59-細(xì)胞內(nèi)P-STAT5的MFI為(23.91±18.50)，明顯低于CD34+CD59+細(xì)胞(63.72±49.48)(P<0.01)和正常對(duì)照組CD34+CD59+細(xì)胞(61.20±33

6、.34)(P<0.01)；而PNH患者CD34+CD59+細(xì)胞與正常對(duì)照組CD34+CD59+細(xì)胞P-STAT5差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　?、贕-CSF刺激組，PNH患者CD34+CD59-細(xì)胞P-STAT5的MFI為(36.26±35.15)，明顯低于CD34+CD59+細(xì)胞(123.61±83.53)(P<0.01)和正常對(duì)照組CD34+CD59+細(xì)胞(115.69±58.64)(P<0.01)；而PNH患者CD3

7、4+CD59+細(xì)胞與正常對(duì)照組CD34+CD59+細(xì)胞P-STAT5差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　③SCF刺激組，PNH患者CD34+CD59-細(xì)胞P-STAT5的MFI為(33.59±27.44)，明顯低于CD34+CD59+細(xì)胞(123.53±97.04)(P<0.01)和正常對(duì)照組CD34+CD59+細(xì)胞(128.04±62.29)(P<0.01)；而PNH患者CD34+CD59+細(xì)胞與正常對(duì)照組CD34+CD59

8、+細(xì)胞P-STAT5差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　?、蹽-CSF刺激后，PNH患者CD34+CD59+細(xì)胞P-STAT5的MFI較刺激前增高(59.91±47.40)，明顯超過(guò)CD34+CD59-細(xì)胞(13.17±26.46)(P<0.01)；正常對(duì)照組CD34+CD59+細(xì)胞P-STAT5的MFI較刺激前增高(54.49±51.54)，也明顯超過(guò)PNH患者CD34+CD59-細(xì)胞(13.17±26.46)(P<0.01)

9、，而與PNH患者CD34+CD59+細(xì)胞比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　⑤SCF刺激后，PNH患者CD34+CD59+細(xì)胞P-STAT5的MFI較刺激前增高(59.83±66.79)，明顯超過(guò)CD34+CD59-細(xì)胞(9.77±17.10)(P<0.01)；正常對(duì)照組CD34+CD59+細(xì)胞P-STAT5的MFI較刺激前增高(66.84±54.74)，也明顯超過(guò)PNH患者CD34+CD59-細(xì)胞(9.77±17.10)

10、(P<0.01)，而與PNH患者CD34+CD59+細(xì)胞比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、PNH患者骨髓造血干細(xì)胞異?？寺D114、CD117表達(dá)明顯低于正?？寺?，但胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)蛋白(STAT5)表達(dá)正常；
　　2、PNH克隆在體外應(yīng)用G-CSF、SCFN激后，STAT5磷酸化明顯低于正常造血克隆。這提示PNH克隆細(xì)胞膜CD1145和CD117數(shù)量和功能低下，利用異?？寺?duì)細(xì)胞因子反應(yīng)不好的