芽孢桿菌Q-12的鑒定及其抗菌活性物質(zhì)的研究.pdf

1、據(jù)統(tǒng)計(jì)有80﹪以上的植物病害是由真菌引起的，大多數(shù)真菌在侵害農(nóng)作物的同時(shí)，還產(chǎn)生真菌毒素危害人類健康，目前由真菌引起的植物病害的防治主要以化學(xué)農(nóng)藥為主，因而研究真菌的生物防治極為重要。從堆肥中分離到的菌株Q-12具有強(qiáng)烈抗真菌活性，本研究對Q-12菌進(jìn)行了鑒定并對其發(fā)酵條件和所產(chǎn)生的活性物質(zhì)作了研究。Q-12菌的抗菌譜較廣，幾乎能夠抑制所有的被試真菌，尤其能夠強(qiáng)烈抑制葡萄白腐病菌、草莓蛇病菌、玉米小斑病菌、玉米大斑病菌、玉米彎孢病菌、尖

2、孢鐮刀菌、半裸鐮刀菌、禾谷鐮刀菌、黃瓜菌核病菌、菜豆炭疽病菌、白羽紋病菌等植物病原真菌。此外，Q-12菌還能夠抑制一些食品腐敗菌如毛霉、黑曲霉、黃曲霉、串珠鐮刀菌等。 本文通過對Q-12菌進(jìn)行形態(tài)觀察、革蘭氏染色、芽孢染色發(fā)現(xiàn)其菌體呈短桿狀，兼性厭氧且內(nèi)生芽孢，為革蘭氏陽性菌。API生理生化實(shí)驗(yàn)再次證明其為芽孢桿菌，并且與枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌的生理生化特性相近。16SrDNA同源性序列分析表明，Q-12菌與枯草芽孢桿菌和

3、解淀粉芽孢桿菌的序列同源性均達(dá)到99﹪以上。為進(jìn)一步確定Q-12菌的分類地位，又利用基因yyaR、yyaO、tetL、tetB在解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌中排列順序的差異，再次對該菌在分子水平上進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明Q-12菌為解淀粉芽孢桿菌。 文中探討了碳源、氮源、牛肉膏濃度等對解淀粉芽孢桿菌Q-12生長及其產(chǎn)活性物質(zhì)的影響，確定了其最適的培養(yǎng)基組成為葡萄糖5g/L、NH4Cl1g/L、牛肉膏0.8g/L、氯化鈉5g/L，最適培

4、養(yǎng)溫度為33℃，最適培養(yǎng)pH為6.0，最適培養(yǎng)時(shí)間為30小時(shí)。Q-12菌的發(fā)酵產(chǎn)物不僅能夠抑制真菌菌絲的生長，而且能夠抑制某些產(chǎn)孢真菌如尖孢鐮刀菌孢子的萌發(fā)，對有機(jī)溶劑、蛋白酶、熱和pH值都有很高的穩(wěn)定性，可望用于防治土傳病害。通過硫酸銨沉淀對解淀粉芽孢桿菌Q-12的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行粗提，粗提物經(jīng)陰離子交換層析后得到了四種不同的活性組分，并對其中的一種活性組分QAⅠ再次通過凝膠過濾層析和半制備型反相高效液相層析進(jìn)行了純化，純化后的樣品經(jīng)反相