基質(zhì)細(xì)胞衍生因子(SDF-1)的新受體CXCR7對內(nèi)皮祖細(xì)胞調(diào)節(jié)作用的初探.pdf

1、內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells，EPCs）由骨髓釋放到外周血，參與病損傷區(qū)域的血管新生是治療血管生成相關(guān)疾病的重要途徑。EPCs 從骨髓中動員、遷移、歸巢到血管新生部位，參與血管生成過程中受到外源信號和內(nèi)在因素的級聯(lián)動態(tài)調(diào)節(jié)?；|(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（Stromal cell-derived factor-1，SDF-1）就是一種重要的細(xì)胞的外源信號趨化因子，與其受體結(jié)合后能調(diào)控許多重要的生物反應(yīng)過程。

2、CXCR7(chemokine（C-X-C motif）receptor 7）是近年來發(fā)現(xiàn)的SDF-1的新受體，但是SDF-1/ CXCR7 是否參與調(diào)控血管生成過程國內(nèi)外的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道幾乎沒有。
　　 本研究以EPCs 為切入點(diǎn)，體外考察SDF-1/ CXCR7 對內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖、遷移、黏附和凋亡過程的影響，探討 CXCR7在SDF-1 調(diào)控EPCs 動員、歸巢過程中扮演的角色，初步探索其作用機(jī)理，以便論證以CXCR7 為靶標(biāo)

3、進(jìn)行促進(jìn)或抑制血管生成的可能性，以期為血管新生的診斷及相關(guān)疾病的治療提供新的理論依據(jù)。本文的主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　 ①用密度梯度離心法分離大鼠骨髓單個核細(xì)胞，經(jīng)EBM-2 培養(yǎng)基培養(yǎng)呈現(xiàn)“星型集落”等典型結(jié)構(gòu)，通過內(nèi)皮祖細(xì)胞特異性標(biāo)志CD31和VE-cadherin 以及Ac-LDL和UEA-1 鑒定，證明骨髓來源的單個核細(xì)胞可體外誘導(dǎo)成為功能性的EPCs。
　　 ②用Reverse transcription-

4、PCR和western-blot 免疫印跡法檢測EPCs 細(xì)胞中CXCR4(chemokine（C-X-C motif）receptor 4)和CXCR7的表達(dá)情況；用MTT 法測定分別用抗體阻斷CXCR4、CXCR7 后，對EPCs 細(xì)胞增殖率的影響；通過transwel小室體外侵襲遷移實(shí)驗(yàn)檢測anti-CXCR4和anti-CXCR7 對EPCs 細(xì)胞趨化活性的影響。用CXCR4和CXCR7 抗體分別預(yù)處理EPCs 細(xì)胞后，考察其與

5、單層HUVEC細(xì)胞黏附作用；通過流式細(xì)胞儀檢測anti-CXCR4和anti-CXCR7 對經(jīng)低濃度雙氧水預(yù)處理后EPCs 細(xì)胞活性的影響。結(jié)果表明：EPCs 細(xì)胞中都表達(dá)CXCR4和CXCR7 這兩個受體。用CXCR7 抗體封閉后，EPCs 細(xì)胞的增殖活力顯著下降。
　　 CXCR7 抗體對SDF-1 誘導(dǎo)的EPCs 細(xì)胞遷移影響不顯著。CXCR4與CXCR7 抗體都會抑制EPCs 細(xì)胞與HUVEC 細(xì)胞單層的黏附，CXCR7