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文檔簡介
1、目的:
通過檢測臨床前列腺癌患者組織中HDAC6的表達情況以及與臨床指標的關系,為前列腺癌診斷及治療提供依據(jù)。我們采用多西他賽與曲古抑菌霉素A聯(lián)合給藥的方式,并對前列腺癌腫瘤DU145產(chǎn)生協(xié)同促進凋亡效果的進行評價,探討聯(lián)合應用產(chǎn)生協(xié)同效果的可能機制,為后期兩種藥物聯(lián)合進入臨床提供實驗依據(jù)。
方法:
從病理組織庫中隨機選取臨床資料齊全的前列腺癌組織標本并選取前列腺增生的組織為對照,對HDAC6進行免疫組化染
2、色,觀察其在前列腺癌組織、癌旁組織及前列腺增生組織中的的表達差別;評價HDAC6在前列腺癌與前列腺增生中的表達區(qū)別,分析HDAC6表達與前列腺癌患者年齡、血清PSA水平、Gleason評分、TNM分期的關系。
通過多西他賽與曲古抑菌霉素A聯(lián)合應用作用于體外培養(yǎng)的前列腺癌DU145細胞,CCK-8法測定各組藥物對DU145腫瘤細胞的抑制率,流式細胞儀檢測聯(lián)合用藥的對細胞凋亡指數(shù)、細胞周期的影響;進一步用免疫熒光染色confoca
3、l觀察聯(lián)合用藥對DU145細胞中微管蛋白表達水平影響;并提取細胞總蛋白,western bloting方法檢測細胞中微管蛋白、HDAC6蛋白及細胞凋亡過程中重要的蛋白變化,探討兩藥聯(lián)合用藥產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤作用的可能機制。并在體外建立的前列腺癌DU145裸鼠種植模型中進一步證實這種協(xié)同作用。
結(jié)果:
免疫組化染色前列腺癌組織與癌旁組織中HDAC6表達差異用IPP軟件側(cè)得的累計吸光度值(IOD)來反映,兩組比較HDAC6表
4、達水平統(tǒng)計學上無差異(P>0.05);HDAC6表達水平在不同患者患者年齡、血清PSA、Gleason評分、TNM分期上統(tǒng)計學分析無明顯差異(P>0.05)。
CCK8測定多西他賽與曲古抑菌霉素A抑制DU145腫瘤細胞呈濃度、時間依賴性,曲古抑菌霉素A可降低多西他賽半數(shù)抑制率(IC50)值(P<0.05);流式細胞儀測定兩藥合用組的DU145細胞凋亡指數(shù)及G2/M期細胞比例較單用組升高(P<0.05)。
激光共聚焦及
5、免疫印跡結(jié)果均顯示聯(lián)合用藥可以增加乙?;⒐艿鞍妆磉_水平,與單用藥物組相比有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。Westem檢測到體外培養(yǎng)的腫瘤細胞Bcl-2表達降低,Bax表達升高,caspase表達升高。
DU145裸鼠腫瘤生長受到多西他賽與曲古抑菌霉素A抑制,導致腫瘤內(nèi)部細胞凋亡,兩藥合用抑制腫瘤明顯生長(P<0.05),聯(lián)合應用組較單用藥物組細胞凋亡水平差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。提取裸鼠腫瘤蛋白檢測乙?;⒐艿鞍椎母淖?/p>
6、,以兩藥合用組最明顯,與單用藥物組及空白對照組比較,差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
結(jié)論:
1.HDAC6在前列腺增生組織陰性表達,前列腺癌及癌旁組織中HDAC6表達陽性,且染色強度無明顯差別。HDAC6蛋白在前列腺癌中的表達患者年齡、血清PSA水平、Gleason評分、TNM分期無相關性。
2.多西他賽、曲古抑菌霉素A抑制DU145腫瘤細胞增殖呈濃度、時間依賴性。聯(lián)合應用對體外培養(yǎng)的DU145腫瘤細
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