CD147調(diào)控阿霉素介導的乳腺癌細胞凋亡的研究.pdf

1、背景:
　　CD147是一種重要的腫瘤基因治療的靶分子，在多種腫瘤細胞中高表達，誘導腫瘤細胞及基質細胞產(chǎn)生MMPs、VEGF，與MCT、Integrin、Cyclophilins、Caveolin-1相互作用，影響著腫瘤的侵襲轉移及血管新生，并在腫瘤的凋亡、多藥耐藥形成中發(fā)揮重要的作用。CD147與乳腺癌密切相關，在乳腺癌中高表達，與乳腺癌的病理分級及淋巴結轉移相關聯(lián)，并與乳腺癌患者生存期相關，有Logistic回歸分析顯示患者的

2、生存期會隨著CD147高表達而縮短。研究CD147是否調(diào)控化療藥物誘導的乳腺癌細胞的凋亡對乳腺癌的治療具有一定的意義。
　　目的:
　　探討CD147對阿霉素介導的人乳腺癌MCF-7細胞凋亡的影響。
　　方法:
　　1.將含有CD147及GFP全長cDNA的質粒用瞬時轉染的方法轉入乳腺癌MCF-7細胞，并設置空載(僅含GFP全長cDNA)質粒轉染組作為對照。用Westemblot的方法檢測CD147轉染組及空載質

3、粒轉、染組細胞中CD147蛋白水平的變化、用熒光顯微鏡觀察CD147轉染組MCF-7細胞的GFP表達情況，以驗證CD147質粒是否成功轉入MCF-7細胞.
　　2.將CD147質粒用瞬時轉染的方法轉入乳腺癌MCF-7細胞，并設置空載質粒轉染組作為對照。隨后以不同濃度的阿霉素處理兩組細胞，時間為48h。MTT法測定不同濃度的阿霉素對兩組細胞增殖的影響。
　　3.用流式細胞儀檢測CD147轉染組+可霉素，空載組+可霉素細胞的凋亡

4、。
　　4.將CD147轉染組及空載質粒轉染組細胞加入不同濃度阿霉素(0μM、1μM)，分別標記為:CD147轉染組、空載組。用Westemblot的方法檢測各組細胞中CD147，Cleaved PARP蛋白水平的變化。
　　結果:
　　1.Westemblot試驗證實人乳腺癌細胞株MCF-7細胞無CD147表達，CD147質粒成功轉入MCF-7細胞并表達CD147。熒光顯微鏡下觀察CD147轉染組MCF-7細胞表達綠

5、色熒光蛋白，也驗證了CD147質粒成功的轉染入MCF-7細胞。
　　2.MTT的結果表明:阿霉素能抑制MCF-7空載組細胞、CD147轉染組細胞的增殖能力，并且隨阿霉素濃度的增加，抑制能力也逐漸增強。在相同濃度下，阿霉素對MCF-7空載組細胞抑制率高于CD147轉染組細胞。MCF-7空載組細胞IC50=1.579±0.0257μM，CD147轉染組細胞IC50=2.204±0.0391μM。說明CD147對MCF-7細胞的凋亡有抑

6、制作用。根據(jù)IC50的值，選取1μM的阿霉素進行后續(xù)的細胞凋亡實驗。
　　3.流式細胞儀檢測CD147轉染組MCF-7細胞的凋亡率為8.38±1.09％，明顯低于空載組(P＜0.05)，而空載組凋亡率是21.17±1.35％，說明CD147對MCF-7細胞的凋亡有抑制作用。
　　4.阿霉素(0μM、1μM)處理空載組細胞及CD147轉染組細胞48h后，其兩組細胞Cleaved PARP表達水平隨阿霉素濃度增加均上調(diào)，CD14