端粒酶和腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子共修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文端粒酶和腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子共修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究姓名：王志濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)神外指導(dǎo)教師：張建寧20100601天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文胞分化，提示其具有多向分化潛能，證實(shí)rBMSCs培養(yǎng)成功。第二部分研究是通過(guò)轉(zhuǎn)染pLXSN質(zhì)粒介導(dǎo)的人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶催化亞單位(humantelomerasereversetranscriptasehTERT)來(lái)增強(qiáng)BMSCs端粒酶的活性，獲得TAd5一h

2、TERT調(diào)控的永生化大鼠BMSC，利用ELISA方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的端粒酶活性。同時(shí)，通過(guò)構(gòu)建腺病毒介導(dǎo)的BDNF高效表達(dá)載體Ad5BDNF，將Ad5一BDNF復(fù)合體轉(zhuǎn)染至hTERTBMSC，證明了轉(zhuǎn)染BDNF的永生化BMSC在體外具有一定程度的損傷細(xì)胞修復(fù)作用，為Ad5一BDNF—BMSC的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。第三部分研究中我們選取國(guó)際上較為普遍采用的大鼠液壓顱腦損傷模型，在152Oatm條件下制備大鼠中型顱腦創(chuàng)傷模型，同時(shí)借助于立體定向

3、細(xì)胞移植技術(shù)，將共轉(zhuǎn)染BDNF和hTERT基因的BMSCs移植到損傷腦組織區(qū)，觀察細(xì)胞移植治療后大鼠生存期變化、神經(jīng)損傷評(píng)分(neurologicseverityscore，NSS)的變化以及損傷區(qū)腦組織水腫在核磁共振成像(MRI)的變化，評(píng)價(jià)基因修飾的BMSCs在大鼠液壓顱腦創(chuàng)傷模型體內(nèi)的安全性和對(duì)TBI治療的有效性，為BDNF和BMSCs聯(lián)合治療TBI步入臨床奠定基礎(chǔ)。上述研究結(jié)果表明：大鼠BMSCs易于分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增，長(zhǎng)期體外培

4、養(yǎng)BMSCs可出現(xiàn)過(guò)早老化和過(guò)度增殖等生物學(xué)性狀不穩(wěn)定現(xiàn)象；hTERT正以表達(dá)載體pLXSN—S—hTERT轉(zhuǎn)染至大鼠BMSC，可以使BMSC的端粒酶活性增強(qiáng)，促進(jìn)BMSCs增殖，并保持在長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)過(guò)程中形狀穩(wěn)定性，是建立BMSCs永生化細(xì)胞系的安全可靠而有效的方法；Ad—BDNF—hTERT—BMSCs在體內(nèi)外可以高表達(dá)BDNF，能夠有效減少受損神經(jīng)元的的凋亡，提高腦損傷大鼠的生存率，并能促進(jìn)其神經(jīng)功能的康復(fù)，為BDNF矛HBMSC