PDCD5蛋白在SU細胞和SU-DXM細胞中的表達及意義.pdf

1、研究背景:
　　淋巴瘤(Lymphoma)是一種淋巴細胞克隆性增生的淋巴造血系統(tǒng)的惡性腫瘤,主要發(fā)生于淋巴結(jié),但也可發(fā)生于結(jié)外器官,如肺、胃、腸、皮膚、生殖器官、骨、骨髓及腦等。淋巴瘤可分為霍奇金淋巴瘤及非霍奇金淋巴瘤兩類。近年來,惡性淋巴瘤的發(fā)病率呈上升趨勢,其中B細胞淋巴瘤占大多數(shù)。此外,大量研究發(fā)現(xiàn)淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展、預后及生物學行為與細胞凋亡紊亂密切相關。細胞凋亡受凋亡相關基因控制,目前已經(jīng)知道與惡性淋巴瘤相關的凋亡基因有

2、Survivin、Caspase等。
　　TF-1細胞凋亡相關基因19(TF-1 cell apoptosis-related gene19,TFAR19)是由北京大學人類疾病基因中心從人白血病細胞株 TF-1細胞中克隆到的一種重要凋亡相關新基因,國際人類基因命名委員會將其命名為PDCD5(programmed cell death5)。PDCD5定位于染色體19q12-q13.1,全長基因約6kb,由5個內(nèi)含子及6個外含子組成,

3、cDNA全長為590bp。實驗表明 PDCD5是一個表達廣泛、進化保守的重要凋亡正調(diào)控基因,該蛋白不僅在凋亡過程中表達增加,而且在凋亡早期出現(xiàn)明顯的核轉(zhuǎn)位現(xiàn)象,因而PDCD5可能作為一種新的早期凋亡的標志。由于PDCD5可能通過減少Survivin蛋白及增加Caspase活性來參與細胞凋亡調(diào)控過程,因此其表達異常與腫瘤的形成及發(fā)展進程常密切相關。據(jù)文獻報道,PDCD5在白血病、肝癌、胃癌、乳腺癌、子宮頸癌等多種腫瘤細胞中存在異常表達。但

4、在惡性淋巴瘤細胞株中PDCD5的表達如何尚不清楚。
　　目的:
　　研究人B細胞淋巴瘤細胞系SU細胞上清、SU/DXM細胞上清及使用不同濃度的DXM、VP-16、L-Asp及ADM誘導后的SU細胞上清中PDCD5的表達情況。
　　研究方法:
　　第一章、人B細胞淋巴瘤細胞系SU細胞的生物學特性
　　顯微鏡下觀察SU細胞的細胞形態(tài)、生長狀態(tài);細胞計數(shù)法繪制細胞生長曲線;流式細胞儀檢測細胞表面標記和分析細胞周期

5、分布;
　　第二章、SU/DXM細胞的生物學特性
　　地塞米松體外誘導SU細胞,并于顯微鏡下觀察SU/DXM細胞的細胞形態(tài)、生長狀態(tài);細胞計數(shù)法繪制細胞生長曲線;流式細胞儀檢測細胞表面標記和分析細胞周期分布;MTT法分析耐藥譜及IC50值。
　　第三章、PDCD5在SU細胞和SU/DXM細胞中的表達
　　提取SU細胞和SU/DXM細胞上清,采用PDCD5酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒檢測上述兩種細胞上清中PDCD5的表達

6、情況。
　　第四章、PDCD5在被不同濃度的多種化療藥物誘導后SU細胞上清中的表達
　　使用不同濃度的DXM、VP-16、L-Asp及ADM誘導處于對數(shù)期生長的SU細胞,并提取被誘導后的SU細胞上清,用PDCD5酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒檢測上清中PDCD5的表達情況。
　　結(jié)果:
　　第一章、人B細胞淋巴瘤細胞系SU細胞的生物學特性
　　1.SU細胞的細胞形態(tài):SU細胞培養(yǎng)液清亮,細胞呈懸浮生長,圓形,細胞體

7、積較大,透光性好。
　　2.SU細胞的生長狀態(tài):根據(jù)細胞計數(shù)法繪制細胞生存曲線。細胞周期檢測比例如下:G0/G1期細胞為43.6％、S期細胞為48.5%、G2/M細胞為7.97%。不同細胞周期的SU細胞生長狀態(tài)不同。此外,SU細胞高表達B細胞的相關表面標記,為B細胞系。
　　第二章、SU/DXM細胞的生物學特性
　　1.SU細胞經(jīng)DXM誘導成為多藥耐藥的SU/DXM細胞。SU/DXM細胞的細胞形態(tài)和細胞生長狀態(tài)與SU細

8、胞沒有明顯差異。SU/DXM細胞仍為圓形,懸浮生長,胞體大小無變化,但細胞核中可見少許空泡。
　　2.流式細胞儀檢測細胞周期比例如下:G0/G1期50.9%,S期35.3%,G2/M期13.8%。SU/DXM細胞仍高表達B細胞的相關表面標記,為B細胞系。
　　3.應用MTT法檢測SU/DXM細胞對DXM、Vp-16、ADM和L-ASP的耐藥指數(shù)分別為SU細胞的8.68倍、1.37倍、3.92倍和3.56倍。
　　第三章

9、、PDCD5在SU細胞和SU/DXM細胞中的表達
　　利用酶聯(lián)免疫吸附法檢測SU細胞和SU/DXM細胞上清中PDCD5蛋白水平。SU/DXM細胞上清組中PDCD5蛋白的表達量明顯低于SU細胞上清組,分別為(10.67±1.48)ng/ml和(19.74±2.99)ng/ml,差異有統(tǒng)計學意義(t=8.504,P<0.05)。
　　第四章、PDCD5在被不同濃度的多種化療藥物誘導后SU細胞上清中的表達
　　分別應用不同濃

10、度的DXM、Vp-16、ADM和L-ASP誘導SU細胞,取共培養(yǎng)上清檢測發(fā)現(xiàn),誘導后SU細胞上清中有PDCD5蛋白表達,且DXM、Vp-16的濃度與PDCD5表達水平呈正相關關系。
　　結(jié)論:
　　1.DXM長期體外誘導SU細胞可使其發(fā)生MDR。
　　2.PDCD5蛋白在SU/DXM細胞上清中表達明顯低于SU細胞上清。
　　3.不同濃度化療藥物誘導后SU細胞上清中均存在PDCD5蛋白表達,且DXM、Vp-16的濃