川芎嗪對SD大鼠SAH后腦血管痙攣病理變化的影響及對腦的保護作用實驗研究.pdf

1、目的:川芎嗪對SD大鼠SAH后腦血管痙攣病理變化的影響及對腦的保護作用
　　 材料與方法:采用枕大池二次注血法制備蛛網(wǎng)膜下腔出血模型,選用健康成年SD大鼠60只隨機分成A、B、C、D4組,根據(jù)設(shè)計時間點不同各組均分為3個亞組,每個亞組5只。A組為生理鹽水對照組,即用生理鹽水進行枕大池注入；B組為SAH組:BⅠ、BⅡ、BⅢ亞組分別為SAH模型制作成功后再飼養(yǎng)1天、4天及7天；C組為SAH+尼莫同組:CⅠ、CⅡ、CⅢ亞組分別為SAH

2、模型制作成功后腹腔內(nèi)注入尼莫同0.1mg,以后每天腹腔內(nèi)注入尼莫同0.1mg,再飼養(yǎng)1天、4天及7天； D組為SAH+TMP組:DⅠ、DⅡ、DⅢ亞組分別為SAH模型制作成功后腹腔內(nèi)注入鹽酸川芎嗪20mg,以后每天腹腔內(nèi)注入鹽酸川芎嗪20mg,再飼養(yǎng)1天、4天及7天。各組均在規(guī)定時間點斷頭取腦:在開顱后將海馬從大腦組織中分離,連同腦干及基底動脈取下制成標本。最后切片行H-E染色、Bax、Bcl-2、NF-kBp65和Cox-2免疫組化染色

3、,分別觀察海馬區(qū)神經(jīng)元的存活情況及Bax和Bcl-2的表達；觀察血管壁中NF-kB,Cox-2的變化；觀察基底動脈血管腔橫截面積及血管壁的病理變化.
　　 結(jié)果:
　　 H-E染色切片于光鏡下見生理鹽水對照組(A組)基底動脈管壁平滑,結(jié)構(gòu)完整,與正常血管無差異。SAH組(B組)與A組比較有顯著差異,基底動脈均不同程度地出現(xiàn)管徑變窄,管壁增厚,內(nèi)膜出現(xiàn)皺折,內(nèi)皮細胞部分脫落,內(nèi)彈力層明顯皺折,厚薄不一,有斷續(xù)血管平滑肌細胞

4、肥大,扭曲變形,空泡變性,部分壞死,胞漿濃染,胞核固縮外膜變厚,出現(xiàn)粒細胞和單核細胞浸潤,以day7時最重。SAH+尼莫同組(C組)與B組比較,早期血管痙攣減輕,但后期管壁亦出現(xiàn)炎性增厚改變。SAH+TMP組(D組)與B組比較,血管痙攣減輕,管壁較薄,內(nèi)皮皺折現(xiàn)象減弱,肌層及外膜基本正常,偶見粒細胞和單核細胞浸潤。
　　 免疫組化結(jié)果
　　 NF-kBp65免疫反應(yīng)陽性細胞主要在血管內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞的胞漿和胞核內(nèi)表達

5、； COX2免疫反應(yīng)陽性細胞主要在動脈壁內(nèi)皮和外膜觀察到著色均勻。二者當不用一抗或被同類型的對照抗體替換時,染色缺乏。A組免疫組化結(jié)果顯示幾乎無表達,B組及C組表達明顯,D組有表達,但明顯較B,C組減弱。,
　　 H-E染色切片于光鏡下計數(shù)海馬CA1區(qū)存活神經(jīng)元密度,A組未見神經(jīng)元凋亡；B組可見大量錐體細胞凋亡；C組亦可見錐體細胞凋亡但較B組稍減少。D組海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞凋亡程度較B、C組同時間點明顯減輕。免疫組化染色切片觀察

6、見:Bcl-2和bax陽性細胞主要為胞質(zhì)著色,棕黃色,呈均勻彌漫染色。(1)Bcl-2免疫陽性細胞觀察結(jié)果如下:在A組,bcl-2陽性細胞在海馬神經(jīng)元中幾乎未見表達,B、C、海馬CAl區(qū)bcl-2可見表達,D組與B、C組相比,陽性細胞數(shù)多且較強。(2)bax免疫陽性細胞觀察結(jié)果如下:正常組A組,bax陽性細胞在海馬神經(jīng)元中有很微弱的表達,B、C、D組海馬CA1區(qū)bax表達明顯。B、C組與D組相比,陽性細胞數(shù)多且較強。經(jīng)過統(tǒng)計學處理分析后

7、,各組之間兩兩對比顯示神經(jīng)元存活數(shù)目及Bcl-2和bax表達強度存在顯著性差異。
　　 結(jié)論:
　　 1、SAH引起腦血管狹窄的因為,早期可能是因為血性腦脊液的機械性和化學性刺激引起血管痙攣所致；晚期主要由于血管壁的免疫炎癥反應(yīng)致使血管壁增厚,管腔變窄。
　　 2、SAH可使腦組織中Bcl-2、Bax、NF-kB、COX2的表達升高。
　　 3、川穹嗪(TMP)可能通過促進了SAH大鼠抗凋亡基因Bcl-2