MIF-ERK信號通路對免疫復(fù)合物誘導(dǎo)腎系膜細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的： 1、觀察免疫復(fù)合物對體外培養(yǎng)大鼠腎系膜細(xì)胞增殖的影響。 2、觀察免疫復(fù)合物對MIF/ERK信號傳導(dǎo)通路的影響。 3、探討MIF/ERK信號傳導(dǎo)通路在免疫復(fù)合物誘導(dǎo)腎系膜細(xì)胞增殖中的作用。 方法： 1、體外培養(yǎng)大鼠腎系膜細(xì)胞。 2、用不同濃度的可溶性聚合IgG(AIgG，一種標(biāo)準(zhǔn)的免疫復(fù)合物模型，刺激濃度分別為0μg/ml、250μg/ml、500μg/ml)刺激腎系膜細(xì)胞24小時后

2、，采用SYBR Green Real-time PCR及Western-blot技術(shù)檢測Cyclin-D1 mRNA及蛋白表達(dá)的變化. 3、采用流式細(xì)胞術(shù)分析免疫復(fù)合物對腎系膜細(xì)胞增殖的影響。 4、采用SYBR Green Real-time PCR及RT-PCR技術(shù)分析免疫復(fù)合物刺激腎系膜細(xì)胞后MIF-mRNA表達(dá)的變化；采用Western-blot及細(xì)胞免疫熒光技術(shù)IF分析MIF蛋白表達(dá)的變化及MIF表達(dá)的部位。

3、 5、采用 Western-blot檢測免疫復(fù)合物刺激腎系膜細(xì)胞后總ERK1/2、磷酸化ERK1/2表達(dá)的變化。 6、用ERK1/2阻斷劑PD98059(50μM)抑制ERK1/2信號傳導(dǎo)通路后，采用Western-blot觀察總ERK1/2、磷酸化ERK1/2及Cyclin-D1表達(dá)的變化。 結(jié)果： 1、AIgG刺激體外培養(yǎng)大鼠腎系膜細(xì)胞后，Real-time PCR及Western-blot結(jié)果提示調(diào)控細(xì)

4、胞增殖周期的Cyclin-D1 mRNA及蛋白表達(dá)合成增加。 2、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果提示AIgG刺激體外培養(yǎng)大鼠腎系膜細(xì)胞后，進(jìn)入S期細(xì)胞的百分比增加，即進(jìn)入增殖期的細(xì)胞數(shù)增多。 3、AIgG刺激體外培養(yǎng)大鼠腎系膜細(xì)胞后，Real-time PCR及RT-PCR結(jié)果均提示MIF-mRNA表達(dá)增加。Western-blot及IF結(jié)果提示腎系膜細(xì)胞MIF蛋白表達(dá)合成增加，且MIF表達(dá)合成主要位于腎系膜細(xì)胞的胞漿。 4、A

5、IgG刺激體外培養(yǎng)大鼠腎系膜細(xì)胞后，總ERK1/2表達(dá)無明顯變化，而磷酸化ERK1/2表達(dá)顯著增加。即免疫復(fù)合物刺激腎系膜細(xì)胞后，通過ERK磷酸化方式激活ERK信號傳導(dǎo)通路。 5、當(dāng)用PD98059阻斷ERK1/2信號傳導(dǎo)通路后，總ERK1/2表達(dá)無明顯變化，而磷酸化ERK1/2表達(dá)顯著受抑制；同時調(diào)控細(xì)胞增殖的Cyclin-D1表達(dá)合成也明顯減少。即ERK1/2信號傳導(dǎo)通路通過影響Cyclin-D1的表達(dá)合成來調(diào)控細(xì)胞的增殖。