紅曲E-70及與阿霉素聯(lián)合用藥對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的增殖影響.pdf

1、目的:
　　從天然紅曲中提取有效部位群“紅曲E-70”并初步建立質(zhì)量控制的指紋圖譜;探討紅曲E-70是否能抑制人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的增殖，與紅曲降血脂成分洛伐他汀及抗癌藥阿霉素進(jìn)行比較;探討紅曲E-70與阿霉素最大無(wú)效量聯(lián)合用藥對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的抑制作用是否有協(xié)同作用;探討紅曲E-70與阿霉素最大無(wú)效量聯(lián)合用藥對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的細(xì)胞周期影響;了解其抗癌作用是否有誘導(dǎo)凋亡作用。
　　方法:
　　制備紅曲

2、E-70，采用HPLC法測(cè)定通過(guò)高效液相檢測(cè)紅曲E-70的洛伐他汀含量;采用MTT法測(cè)定紅曲E-70、洛伐他汀、阿霉素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖的影響，篩選出阿霉素最大無(wú)效量;紅曲E-70與阿霉素最大無(wú)效量聯(lián)合用藥對(duì)MCF-7增殖的影響;對(duì)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)紅曲E-70及其與阿霉素最大無(wú)效量聯(lián)合用藥作用于MCF-7的細(xì)胞周期分布;Hoechst33342染色觀察紅曲E-70及其與阿霉素最大無(wú)效量聯(lián)合用藥作用于MCF-7細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài);

3、分光光度法檢測(cè)檢測(cè)紅曲E-70及其與阿霉素最大無(wú)效量聯(lián)合用藥對(duì)MCF-7細(xì)胞Caspase-3活性的影響。
　　結(jié)果:
　　1.提取紅曲E-70的操作方法簡(jiǎn)單，采用高效液相色譜法測(cè)得每1mg紅曲E-70（甲醇溶解）中含有洛伐他汀0.006mg，每1mg紅曲E-70（水溶解）中含有洛伐他汀0.001mg。
　　2.經(jīng)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，紅曲E-70的有效成分抑制MCF-7增殖;通過(guò)前期高效液相實(shí)驗(yàn)檢測(cè)紅曲E-70當(dāng)中的洛伐他汀

4、含量，紅曲E-70最小有效量中，1ml紅曲E-70含有洛伐他汀0.001μg，洛伐他汀含量是紅曲E-70的千分之一。經(jīng)換算后，對(duì)應(yīng)紅曲E-70的加入量作用于MCF-7，紅曲當(dāng)中的洛伐他汀含量對(duì)MCF-7的增殖抑制作用不明顯，紅曲E-70抑制作用于人乳腺癌MCF-7細(xì)胞比洛伐它汀更好;本實(shí)驗(yàn)篩選出阿霉素抑制人乳腺癌MCF-7增殖的最大無(wú)效量為0.0001μmol/L。
　　3.阿霉素抑制人乳腺癌MCF-7增殖的最大無(wú)效量為0.000

5、1μmol/L，紅曲E-70在50～150μg/ml濃度范圍與阿霉素最大無(wú)效量0.0001μmol/L聯(lián)合用藥，與對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)，與紅曲E-70組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4.紅曲E-70及其與阿霉素最大無(wú)效量聯(lián)合用藥都是使細(xì)胞停滯在G1期，控制進(jìn)入S期的檢測(cè)點(diǎn)（G1期檢測(cè)點(diǎn)），防止受損的DNA和未完成復(fù)制的DNA進(jìn)入有絲分裂，S期細(xì)胞減少，說(shuō)明腫瘤增殖活性己有所減弱，從而達(dá)到抗腫

6、瘤的目的;經(jīng)Hoechst33342染色，熒光顯微鏡下觀察，正常細(xì)胞的細(xì)胞核呈正常的藍(lán)色，而類似凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核會(huì)呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，顏色有些發(fā)白。紅曲E-70組和紅曲E-70與阿霉素聯(lián)合用藥組隨著濃度的增大，細(xì)胞凋亡的趨勢(shì)增加;不同濃度紅曲E-70及其與阿霉素聯(lián)合用藥作用于MCF-7細(xì)胞24h后，Caspase-3的活力與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.高效液相色譜法測(cè)得每1mg紅曲E

7、-70（甲醇溶解）中含有洛伐他汀0.006mg，每1mg紅曲E-70（水溶解）中含有洛伐他汀0.001mg，用水溶解紅曲E-70中的洛伐他汀含量是紅曲E-70的千分之一。
　　2.紅曲E-70抑制MCF-7增殖，洛伐他汀對(duì)應(yīng)紅曲E-70的加入量作用于MCF-7，其對(duì)MCF-7的增殖抑制作用不明顯，可能不是紅曲E-70主要抗腫瘤成分。阿霉素抑制人乳腺癌MCF-7增殖的最大無(wú)效量為0.0001μmol/L，與紅曲E-70聯(lián)合用藥對(duì)MC