Trk受體在腦缺血中表達(dá)以及激活特性的研究.pdf

1、背景：神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(neurotrophic facto ，NTF)是近年來(lái)腦缺血研究中最活躍的領(lǐng)域之一，其主要生物學(xué)效應(yīng)是通過(guò)與靶細(xì)胞上的Trk受體相互作用而產(chǎn)生的。Trk即原肌球蛋白受體激酶（tropomyosin receptor kinase），是原癌基因trk編碼的一種單跨膜糖蛋白，受體酪氨酸激酶超家族成員之一，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)分布廣泛。研究表明神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子與Trk膜外段結(jié)合后能觸發(fā)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的抗凋亡信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)促進(jìn)細(xì)胞生存、

2、分化，因此對(duì)Trk的表達(dá)激活模式以及其與腦缺血關(guān)系的研究有重要的理論及實(shí)際價(jià)值。 目的：觀察大鼠局灶性腦缺血后神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體Trk在大腦各區(qū)的表達(dá)特點(diǎn)，以及缺血不同時(shí)間點(diǎn)Trk和其下游信號(hào)蛋白Akt激活的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，探討其與缺血損傷的關(guān)系。觀察腦缺血后外周大劑量應(yīng)用β-神經(jīng)生長(zhǎng)因子（β-NGF）對(duì)該信號(hào)系統(tǒng)的影響，探討其腦缺血保護(hù)的作用機(jī)理并探討其治療價(jià)值。 材料和方法：建立大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞（MCAO）模型，在缺

3、血后2h到72小時(shí)的不同時(shí)間點(diǎn)，應(yīng)用Trk（C-14）抗體，通過(guò)免疫組化方法觀察急性缺血不同時(shí)間及各腦區(qū)Trk表達(dá)陽(yáng)性的神經(jīng)元的動(dòng)態(tài)改變。應(yīng)用抗磷酸化特異性抗體：Trk（p-Trk，Try680）抗體，Akt（p-Akt，Ser473）抗體，通過(guò)免疫組化和Western印跡法檢測(cè)急性缺血不同時(shí)間點(diǎn)以及腹腔注射β-NGF后半暗帶組織活化的Trk和Akt數(shù)量的變化。應(yīng)用尼氏染色以及TTC染色觀察缺血以及應(yīng)用藥物后的病理變化。 結(jié)果：

4、正常腦組織中Trk受體廣泛表達(dá)，缺血后梗塞中心Trk表達(dá)急劇下降，24h后完全消失，而半暗帶及海馬DG區(qū)Trk陽(yáng)性神經(jīng)元自缺血6h開始顯著增多，持續(xù)整個(gè)缺血期。海馬CA1區(qū)于缺血24h后Trk表達(dá)開始緩慢增高。缺血側(cè)的其它腦區(qū)及對(duì)側(cè)非缺血腦區(qū)也有Trk表達(dá)的增高。缺血2h后半暗帶Trk磷酸化開始不斷增加，Akt的磷酸化則先減少，后逐漸回復(fù)。注射β-NGF能進(jìn)一步促使Trk的磷酸化，并能使Akt磷酸化減少的趨勢(shì)消失。TTC染色顯示腹腔大劑