牙髓干細胞與牙乳頭細胞生長分化調(diào)控因素的研究.pdf

1、牙髓干細胞是牙齒組織工程重要的種子細胞之一，具有增殖能力強，自我更新及多向分化的能力，在維持牙髓組織的動態(tài)平衡中發(fā)揮了重要作用。由于牙齒發(fā)育是一個長期而復雜的過程，這期間受多種因素的影響，機體自身的狀態(tài)、牙齒所處的局部微環(huán)境以及組織內(nèi)細胞間的相互作用、細胞內(nèi)外信號分子的調(diào)控等因素都參與調(diào)控牙齒的發(fā)育。本實驗通過比較幼年期和成年期大鼠牙髓干細胞的增齡性變化，以期更深入的了解牙髓干細胞的基本特性，并將不同時期的發(fā)育微環(huán)境作用于牙髓干細胞，觀

2、察對其生物學特性的影響，并利用RNAi技術沉默牙髓干細胞的前體細胞牙乳頭細胞中的頜面發(fā)育相關新基因Mcpr1，以觀察Mcpr1對牙乳頭細胞增殖能力的影響。
　　所取的研究結果如下：
　　1、不同時期牙髓干細胞生物學特性的比較
　　本實驗利用了生后2周和4月齡SD大鼠作為研究模型，首先原位切片觀察兩個時期牙髓的組織學差異，然后體外培養(yǎng)牙髓干細胞，用MTT，及細胞周期的方法檢測兩個時期牙髓干細胞增殖能力的差異，堿性磷酸酶試

3、劑盒檢測ALP活性，Real-timePCR檢測兩個時期細胞表達成骨基因的差異，比較礦化誘導液誘導兩個時期牙髓干細胞后其體外的礦化能力，將兩個時期的牙髓干細胞做成細胞團進行大鼠腎被膜下移植，比較其體內(nèi)礦化能力。結果顯示：幼年鼠牙髓干細胞較成年鼠有著較強的增殖能力，而成年鼠牙髓干細胞較幼年鼠有較強的礦化能力。
　　2、牙髓細胞條件培養(yǎng)液對不同時期牙髓干細胞增殖分化能力的影響
　　為了驗證細胞微環(huán)境對牙髓干細胞的增殖分化是否有影

4、響，我們獲取幼年鼠和成年鼠兩個時期的牙髓細胞，并收集其細胞條件培養(yǎng)液，分別用這兩個時期的牙髓細胞條件培養(yǎng)液誘導這兩個時期的牙髓干細胞，檢測牙髓干細胞增殖與骨向分化能力的改變。實驗結果表明：成年鼠牙髓干細胞經(jīng)過幼年鼠牙髓細胞條件培養(yǎng)液誘導后增殖能力變強，而幼年鼠牙髓干細胞經(jīng)過成年鼠牙髓細胞條件培養(yǎng)液誘導后增殖能力變?nèi)?。在分化方面，亦表現(xiàn)出同樣的趨勢，經(jīng)過成年鼠牙髓細胞條件培養(yǎng)液誘導的幼年鼠牙髓干細胞分化能力變強，而經(jīng)過幼年鼠牙髓細胞條件培

5、養(yǎng)液誘導的成年鼠牙髓干細胞的骨向分化能力變?nèi)酢Ｒ陨辖Y果提示細胞條件培養(yǎng)液可以作為一種微環(huán)境改變由于年齡因素所帶來的生物學特性的差異。
　　3、Mcpr1對牙乳頭細胞增殖能力的影響
　　為了驗證頜面發(fā)育相關新基因Mcpr1是否在牙齒發(fā)育中也發(fā)揮一定的作用，我們利用RNAi技術，沉默牙乳頭細胞中的Mcpr1。結果發(fā)現(xiàn)：沉默Mcpr1后對牙乳頭細胞增殖具有促進作用，說明Mcpr1具有抑制牙乳頭細胞增殖的作用。此結果提示Mcpr1不