1，25（OH）-,2-VD-,3-、降鈣素對小鼠成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞增殖及OPG-RANKL-RANK表達(dá)影響的實驗研究.pdf

1、目的:1,25(OH)<,2>VD<,3>和降鈣素對小鼠成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞增殖及OPG/RANKL表達(dá)的影響以及大鼠股骨干骺端中RANK表達(dá)的實驗研究.方法:取出生24小時內(nèi)的小鼠30只,無菌的條件下取出關(guān)節(jié)軟骨和顱骨,應(yīng)用酶消化法進(jìn)行軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞的培養(yǎng),在培養(yǎng)軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞的培養(yǎng)液中加入不同濃度的1,25(OH)<,2>VD<,3>或者降鈣素,首先應(yīng)用MTT法檢測這兩種藥物對成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞增殖的影響,然后應(yīng)用RT-PCR

2、法檢測其對OPG/RANKL mRNA的表達(dá)及ELISA法檢測OPG蛋白分泌的影響.應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測不同鼠齡的去勢大鼠股骨干骺端中RANK的表達(dá).結(jié)果:1,25(OH)<,2>VD<,3>可以抑制成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的增殖.降鈣素能促進(jìn)成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的增殖.1,25(OH)<,2>VD<,3>能抑制成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞中OPG mRNA的表達(dá)及增強(qiáng)RANKL mRNA的表達(dá),并能促進(jìn)成骨細(xì)胞中OPG蛋白的分泌;降鈣素能增強(qiáng)

3、成骨細(xì)胞中OPG mRNA的表達(dá)同時抑制成骨細(xì)胞中RANKL mRNA的表達(dá),并能促進(jìn)OPG蛋白的分泌,在軟骨細(xì)胞中降鈣素對OPG mRNA的表達(dá)沒有明顯的影響但能抑制RANKL mRNA的表達(dá).在老年雌性大鼠的股骨干骺端皮質(zhì)骨外膜中RANK的表達(dá)較12周鼠齡的股骨干骺端中RANK的表達(dá)減弱,骨內(nèi)膜中RANK的表達(dá)在不同的鼠齡中變化不明顯.在去勢大鼠的小梁骨中RANK的表達(dá)較假手術(shù)組大鼠明顯增強(qiáng).結(jié)論:1,25(OH)<,2>VD<,3