變異鏈球菌luxS基因在鐵代謝和氧化應(yīng)激中的功能研究.pdf

1、目的: 探討luxS基因在變異鏈球菌鐵代謝方面的功能;比較標(biāo)準(zhǔn)株和luxS基因突變株在過氧化氫培養(yǎng)基中不同時間的生存率差異，以及鐵螯合劑對生存率的影響，探討luxS基因在變異鏈球菌氧化應(yīng)激中的作用及機(jī)制。
　　 方法: 利用變異鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株以及前期實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建成功的luxS基因突變株，通過測定兩菌株在不同濃度鐵限制條件培養(yǎng)基中24 h的吸光度值（A值），以及l(fā)uxS基因突變株在加入外源性鐵或者標(biāo)準(zhǔn)株上清液的鐵限制條件培養(yǎng)基中培養(yǎng)2

2、4 h的A值，比較兩菌株的生長差異;變異鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株和luxS基因突變株培養(yǎng)至對數(shù)中期分成三組，一組作為對照組在普通乳酪消化胨酵母(TPY)培養(yǎng)液中生長，另兩組作為實(shí)驗(yàn)組，其中一組加入過氧化氫終濃度58.8 mmol/L的TPY培養(yǎng)液中，另一組加入含有鐵螯合劑2，2'-聯(lián)吡啶的過氧化氫終濃度為58.8mmol/L的TPY培養(yǎng)液中。分別在厭氧培養(yǎng)的0.5、1、2h取菌液采用平板活菌計數(shù)法測定活菌數(shù)，計算生存率，統(tǒng)計學(xué)分析。
　　

3、結(jié)果: 培養(yǎng)24 h，兩種菌株在鐵螯合劑濃度為0.1 mmol/L的培養(yǎng)基中均未表現(xiàn)明顯生長抑制(P＞0.05)，在螯合劑濃度增大至0.3 mmol/L時，突變株表現(xiàn)出生長抑制(P＜0.05)，在螯合劑濃度至0.5 mmol/L時，生長抑制更為顯著(P＜0.001)。在鐵限制培養(yǎng)基中生長抑制的luxS基因突變株轉(zhuǎn)移至新鮮培養(yǎng)基、外源性鐵或標(biāo)準(zhǔn)株上清液加入的同濃度鐵限制培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h，突變株的生長均能達(dá)到較高細(xì)胞密度(P＜0.05)