戊型肝炎病毒感染機制初步研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩134頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、戊型肝炎病毒(HEV)不穩(wěn)定易降解,難以從載毒標本中分離,而迄今為止仍沒有有效的細胞培養(yǎng)模型,這很大程度上限制了HEV感染致病機制的研究。近年來,隨著對HEV研究的深入,較好模擬了HEV病毒農殼表面結構的重組蛋白為研究HEV與宿主細胞相互作用提供了一條新的途徑。 HEV衣殼由單一蛋白(pORF2)組成,大量研究表明pORF2的重組表達片段p239(aa368—606)很好地模擬了HEV的免疫優(yōu)勢中和表位。p239對HEV與原代肝

2、細胞、HepG2細胞的吸附阻斷,p239對多株細胞系具有與HEV相似的嗜性,以及多株HEV特異單抗對p239與HepG2細胞結合的特異阻斷,強有力地提示p239同時也很好地模擬了HEV與細胞膜的結合所具備的表面結構特征。因此,p239與HepG2細胞的吸附模型是探討HEV與細胞膜相互作用的可靠工具。 不同結合區(qū)域的HEV單抗及其Fab片段對p239吸附細胞的阻斷結果提示,p239表面至少存在兩個細胞受體結合區(qū)域:其一為HEV的主

3、要免疫優(yōu)勢中和表位(ORF2aa459—606),另一個區(qū)域為aa423—438。這兩個區(qū)域均對p239與細胞的特異性吸附有貢獻,均能單獨介導p239與嗜性細胞的吸附,但aa459—606區(qū)域吸附細胞的能力要明顯強于后者,是介導p239吸附的主要部位。aa423—438區(qū)域與細胞表面作用力弱,在HEV結合過程中很可能只是增加病毒與主要受體結合的機會。 缺失了aa423—438的p239突變體△239保留了免疫優(yōu)勢中和表位,與p2

4、39一樣均能阻斷天然HEV對HepG2細胞的感染吸附。而喪失免疫優(yōu)勢表位的233N則不能有效阻斷。此結果表明HEV與嗜性細胞的結合很可能同p239與HepG2細胞之間的結合一樣,也是通過這兩個區(qū)域,并且主要免疫優(yōu)勢區(qū)域(ORF2aa459—606)在HEV與細胞結合過程中發(fā)揮主要作用。 通過酵母雙雜交,從人肝細胞cDNA文庫中篩出四個可能與HEV衣殼蛋白相結合的蛋白:肝細胞藥物代謝酶(p450)、轉化相關蛋白(TRP13)、p3

5、8相結合蛋白(p38IP)、DDAH2。并通過免疫共沉淀初步驗證了p38IP與E2的結合,提示HEVORF2激活MAPKp38通路的可能。 通過親和層析篩選HepG2、猴肝組織中與p239相結合的蛋白,并利用二維電泳(2—DE)結合生物質譜技術分離鑒定這些結合蛋白,得到6個可能與p239相互作用的蛋白:HSP90、GRP78/Bip、alphatubulin、P43、ATPasebetasubunit、某未命名蛋白。并通過免疫共

6、沉淀、細胞共定位等多種實驗手段進一步驗證了GRP78/Bip、HSP90與p239的結合。結果表明,GRP78/Bip與p239、HSP90與p239在HepG2細胞內共定位。并且p239與E.coli表達經純化的GRP78/Bip可直接結合,提示它們在細胞內的相互作用不是經由第三者為中介的結合。同時,ATP的加入會導致p239與GRP78/Bip結合的可逆解離,提示p239與GRP78/Bip的結合是ATP依賴的特異性結合,GRP78

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論