右歸飲聯(lián)合干細胞介入治療早期股骨頭缺血性壞死的實驗研究.pdf

1、目的：觀察右歸飲聯(lián)合干細胞介入治療早期股骨頭缺血性壞死的療效，探討該方法在促進再血管化、再骨化方面的作用及機理。為臨床上推廣使用該方法提供客觀的實驗依據(jù)。
　　方法：健康雄性成年畢格犬24只，隨機分為4組：模型組、右歸飲組、干細胞介入組、干細胞介入加右歸飲組各6只。采用液氮冷凍法造模，建立畢格犬早期股骨頭缺血性壞死模型，同時分離、培養(yǎng)、增殖骨髓基質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells,MSC

2、s），傳至第三代細胞后予Brdu標記細胞。造模完成后，干細胞介入組及干細胞介入加右歸飲組行動脈灌注標記后的MSCs。采用Seldinger法插管，確定股骨頭供血動脈后，灌注MSCs1ml（細胞密度：5×106-1×107/ml）。介入術(shù)后，右歸飲組及干細胞介入加右歸飲組每天予以右歸飲灌胃100ml。治療后一個月及二個月分批處死動物。觀察股骨頭大體、影像學(xué)及病理組織學(xué)改變，同時觀察股骨頭供血血管的數(shù)量及直徑的變化情況，以及 VEGF、Br

3、du免疫組織化學(xué)陽性表達情況和熒光定量 RT-PCR分析VEGFmRNA的表達情況。所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行分析處理，采用單因素方差分析。
　　結(jié)果：①一般指標及大體觀察：各治療組較模型組畢格犬跛行有改善，股骨頭外形更圓滑，軟骨面更完整；
　?、贛RI觀察：各治療組較模型組明顯改善，干細胞介入加右歸飲組更明顯，T1W略低信號，T2W和STIR未見明顯信號異常；
　?、跠SA觀察：干細胞介入組和干細胞介

4、入加右歸飲組治療后可見供血動脈分支增粗、增多，原阻塞血管再通。治療后較治療前的血管數(shù)量明顯增多、血管直徑顯著增粗（P<0.01），同一時段比較，干細胞介入加右歸飲組較干細胞介入組的血管計數(shù)有增多、血管直徑有增粗（P<0.05, P<0.01）；
　?、芙M織病理學(xué)及免疫組織化學(xué)：各治療組較模型組的結(jié)構(gòu)有明顯改善。干細胞介入加右歸飲組較其他各組的VEGF陽性表達率都明顯增高（P<0.01），且治療后二個月較治療后一個月的VEGF陽性表

5、達率顯著增高（P<0.01）。干細胞介入加右歸飲組較干細胞介入組的Brdu、成骨細胞、軟骨細胞及血管陽性表達都明顯增高（P<0.01, P<0.05），干細胞介入加右歸飲組治療后二個月較治療后一個月的Brdu、成骨細胞、軟骨細胞及血管陽性表達都明顯增高（P<0.01，P<0.05）；
　?、轃晒舛縍T-PCR：干細胞介入加右歸飲組較其他各組表達量增多（P<0.01，P<0.05），各治療組的VEGF表達都高于模型組（P<0.01

6、），干細胞介入加右歸飲組及干細胞介入組治療后二個月 VEGF的表達都高于治療后一個月（P<0.01）。
　　結(jié)論：第一，右歸飲聯(lián)合干細胞介入治療早期股骨頭缺血性壞死效果顯著，該方法能夠促進VEGF的表達增強，能夠有效地改善壞死股骨頭的血供、促進修復(fù)，可以早期有效治療股骨頭壞死，并預(yù)防塌陷。第二，液氮冷凍法可以成功的造成早期股骨頭缺血性壞死模型。符合股骨頭壞死病變的一般規(guī)律，且具有良好的重復(fù)性，壞死成功率高，造模所需時間短，動物死亡