高滲氯化鈉羥乙基淀粉對全身高溫大鼠的治療作用.pdf

1、全身高溫用于治療惡性腫瘤已廣泛應用于臨床，但該療法在殺滅腫瘤細胞的同時，也會對機體本身產(chǎn)生一些不利的影響。研究表明，晚期腫瘤患者體外熱灌注期間，全身高溫使患者全身血管擴張，循環(huán)阻力下降，心輸出量增加，心血管系統(tǒng)呈現(xiàn)“高排低阻”的特征，同時大量排汗和呼吸道蒸發(fā)也會引起大量的液體丟失。為維持血流動力學穩(wěn)定常輸入大量的液體，而輸入的液體量很難剛好符合機體的需求，往往是輸入過多的液體，臨床上在以輸注林格氏液和單純?nèi)斯つz體為主的前提下很容易導致肺

2、水腫和腦水腫的發(fā)生?，F(xiàn)有的研究指出脈絡叢血腦脊液屏障和毛細血管血腦屏障一起維持神經(jīng)細胞的液體平衡，任一屏障運輸功能障礙都將導致水、離子和蛋白進入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，這些屏障的破壞將導致腦水腫和其它適應性機能的喪失。動物實驗表明脈絡叢上皮細胞和室管膜細胞對全身高溫十分敏感，將大鼠置于38℃的環(huán)境中加熱4小時，血漿中伊文思蘭和碘131轉運至腦脊液的量明顯增加，背側海馬和尾狀核明顯藍染，并出現(xiàn)脈絡叢上皮細胞的破壞和室管膜細胞的損害，腦室的擴大和神經(jīng)

3、纖維網(wǎng)的破壞，血腦脊液屏障的破壞伴隨著在海馬，尾狀核，丘腦和下丘腦部位明顯的腦水腫形成。臨床上實施全身高溫的腫瘤患者，部分在麻醉結束后會出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的異常表現(xiàn)，可能與熱應激和逾量輸液引起的腦水腫有關。 材料和方法: 1．實驗動物： 成年雄性SD大鼠75只，體質(zhì)量（220～250）g，由南方醫(yī)科大學實驗動物中心提供。 2．全身高溫模型的制作： 實驗大鼠用3％的戊巴比妥鈉按45mg/kg腹腔注射，

4、麻醉成功后行股靜脈穿刺置管用于液體輸注，行股動脈穿刺置管連接動脈換能器監(jiān)測平均動脈壓（MAP），然后將大鼠放入36℃具備生物氧供給的加溫艙中加熱3h以使肛溫達到（41～42）℃，加熱結束后將大鼠置于室溫下降溫1h，然后給予相應的處理。加熱開始時按實驗分組用微量泵輸入相應的液體，所有液體在30min內(nèi)恒速輸完。 3．實驗分組及處理因素： 實驗大鼠隨機分成5組，每組15只，分組及處理因素分別為： ①正常對照組（C組）

5、25℃-26℃的可控環(huán)境; ②高溫組（HT組）加熱不輸液; ③高溫林格組（RL組）36 ml/kg RL; 4．觀測指標與標本的采集： 分別于加熱前（T0）、加熱15min（T1）、加熱30 min（T2），加熱45 min（T3），加熱60min（T4），加熱75min（T5），加熱90min（T6），加熱105min（T7），加熱120min（T8），加熱135min（T19），加熱150min（T1

6、0），加熱165min（T11），加熱180min（T12）共13個時點采集平均動脈壓和肛溫的數(shù)據(jù)，并分別于加熱前（基礎值），輸液結束時，加熱結束時抽取動脈血檢測血氣。實驗結束時取腦組織進行腦組織百分含水量，伊文思蘭滲出量的測定和海馬錐體細胞形態(tài)學觀察。 5．腦組織百分含水量的測定： 每組取六只大鼠，于實驗結束時斷頭取腦，將取得的腦組織放在內(nèi)有0．5ml生理鹽水濕潤的定性濾紙培養(yǎng)皿中，以防水分蒸發(fā)，剝離干凈軟腦膜和血凝塊

7、，濾紙吸干表面液體，取右腦組織（0．2～0．3）g，放入105℃電熱恒溫干燥箱內(nèi)烘烤72h至恒重后稱干重（兩次干重之差≤0．0002g），根據(jù)Elliot公式計算腦組織百分含水量，腦含水量（％）=（濕重-干重）/濕重×100％。 6．腦組織伊文思蘭含量的測定： 每組取六只大鼠，待肛溫降至37℃時，從股靜脈注入2％的伊文思蘭3ml/kg，1h后開胸暴露心臟，將穿刺針自心尖部插入心臟并送達主動脈開口處固定，剪開右心耳，用37

8、℃肝素生理鹽水（100u/ml）灌洗至右心耳流出清亮的液體，斷頭取腦，將取得的腦組織放在內(nèi)有0．5ml生理鹽水濕潤的定性濾紙培養(yǎng)皿中，以防水分蒸發(fā)，剝離干凈軟腦膜，濾紙吸干表面液體，取右腦組織（0．2～0．3）g，稱濕重后置于盛有3ml甲酰胺的試管中，加上橡皮塞，置37℃恒溫水浴箱中，48h后1500g離心10min，吸取上清液，用Molecular Devices M5連續(xù)光譜多功能微孔閱讀器于波長632nm處測吸光度（OD值）。根據(jù)

9、標準曲線，計算EB含量（μg/g，腦濕重）。 7．海馬錐體細胞細胞形態(tài)學的觀察： 每組取3只大鼠待肛溫降至37℃時開始計時，1h后開胸暴露心臟，將穿刺針自心尖部插入心臟并送達主動脈開口處固定，剪開右心耳，經(jīng)升主動脈快速灌注37℃肝素鹽水（100u/ml）共150ml，繼之快速灌注冰冷的4％多聚甲醛200ml，再用其300ml在2小時內(nèi)慢速灌注。斷頭取腦，取右半腦組織浸入4％多聚甲醛內(nèi)，待溫度升至4μ后固定48小時，修成厚

10、4mm塊，常規(guī)灑精脫水，石蠟包埋，行5μm冠狀切片，作HE染色，Nikon顯微鏡下觀察，照像。 8．統(tǒng)計學分析： 所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用SPSS13．0統(tǒng)計學軟件進行分析。每組動物平均體質(zhì)量，基礎肛溫，基礎血壓，腦組織百分含水量和伊文思蘭滲出量指標的組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD法，各采集點的平均動脈壓，肛溫，動脈血氣分析采用重復測量數(shù)據(jù)的方差分析，不同時間點的組間多重比較和組內(nèi)不

11、同時間點的多重比較均采用LSD法，P<0．05認為差異有顯著性意義。 結果: 1．基本資料： 各組動物平均體質(zhì)量，基礎肛溫和基礎血壓差異無顯著性（P>0．05）。 2．平均動脈壓的變化： 經(jīng)重復資料的方差分析，顯示組間大鼠的MAP在加熱過程中有顯著性差異（F=31．923 P=0．000），時間點間有差異（F=55．191 P=0．000），二者有交互作用（F=9．413 P=0．000），進一步

12、進行單獨效應分析，對各時點內(nèi)的不同組間和各組內(nèi)的不同時點的MAP進行LSD多重比較，結果顯示在T11和T12兩個時點，HT組大鼠的MAP與其他各實驗組相比均有顯著性差異（P<0．05），HSH組大鼠的MAP與C組的組間比較差異均無顯著性，而RL組的MAP較C組降低。 3．肛溫的變化： 經(jīng)重復資料的方差分析，顯示組間大鼠的肛溫在加熱過程中有顯著性差異（F=729．519 P=0．000），時間點間有差異（F=3208．79

13、0 P=0．000），二者有交互作用（F=210．281 P=0．000），進一步進行單獨效應分析，對各時點內(nèi)的不同組間和各組內(nèi)的不同時點進行LSD多重比較，結果顯示在不同時點和不同組間，各實驗組大鼠的肛溫升高，HSH組大鼠的肛溫與其它各組相比均有顯著性差異（P<0．05）。 4．腦組織百分含水量的變化： 各組大鼠的腦組織百分含水量有顯著性差異（F=81．886，P=0．000），C、HT、RL、HRL、HSH組大鼠的腦

14、組織含水量分別為（％）：78．11±0．58、82．83±0．54、81．86±0．57、80．22±0．60、79．15±0．26；對組間進行LSD多重比較顯示：HSH組大鼠的腦組織百分含水量較C組升高，HSH組與HT組大鼠的腦組織百分含水量差異有顯著性（P<0．05）。 5．腦組織伊文思蘭滲出量的變化： 各組大鼠的朗滲出量有顯著性差異（F=286．629 P=0．000），C、HT、RL、HRL、HSH組的EB值分別

15、為（ug/g）：2．26±0．09、9．79±0．48、8．41±0．33、6．98±0．61、5．87±0．38，通過組問多重比較顯示，HSH組大鼠的EB滲出量較C組升高，HSH組與HT組大鼠的EB滲出量差異有顯著性（P<0．05）。 6．動脈血氣的變化： 經(jīng)重復資料的方差分析顯示，在加溫過程中，HT組大鼠的PH、PaO2、PaCO2、HCT、Na+、K+與C組相比有顯著性差異（P<0．05），組間及各時點內(nèi)的多重比較

16、顯示：在輸液結束后，HSh組的Na+和K+升高，與C組相比有顯著性差異（P<0．01），而PaO2、PaCO2、PH與C組相比差異無統(tǒng)計學意義。PH、PaO2、PaCO2、HCT、Na+、K+在RL和HRL組差異無顯著性。 7．海馬錐體細胞形態(tài)學的變化： 正常腦組織海馬CA3區(qū)的錐體細胞排列整齊，形態(tài)完整，胞核飽滿，核仁清晰，尼氏體豐富。HT組中細胞數(shù)目減少，殘留的神經(jīng)元細胞核大溶解、消失，胞體增大，邊緣不清，尼氏體消失

17、，大部分成為鬼影細胞。RL組中細胞形態(tài)不規(guī)則，呈多角型或梭型，胞膜皺縮，胞核固縮、濃染，核膜凹陷，核仁模糊不清或消失，細胞質(zhì)空泡樣變。HRL組中空泡樣變細胞明顯減少，可見大量核濃然的細胞。HSH組中大量正常的錐體細胞間散落少量的細胞核濃染的神經(jīng)元，偶見胞核固縮、核膜凹陷、核質(zhì)濃染、核仁模糊不清、胞體及胞核形態(tài)不規(guī)則的神經(jīng)元。 結論: 1．全身高溫導致大鼠血腦屏障通透性升高，腦水腫形成，海馬錐體細胞變性與壞死。 2