高滲氯化鈉羥乙基淀粉注射液對(duì)急性顱內(nèi)高壓伴失血性休克犬腦組織形態(tài)學(xué)及氧自由基的影響.pdf

1、顱腦外傷在平時(shí)和戰(zhàn)時(shí)都是最嚴(yán)重的創(chuàng)傷之一，合并失血性休克的重度腦外傷死亡率極高。休克時(shí)常輸注大量液體以維持血壓穩(wěn)定，卻往往造成腦組織水腫，引起繼發(fā)性損傷；缺血/再灌注時(shí)產(chǎn)生大量的氧自由基，常造成腦細(xì)胞的不可逆損害；而常規(guī)應(yīng)用脫水利尿藥治療腦水腫降低顱內(nèi)壓(intracranialpressure，ICP)時(shí)，又會(huì)導(dǎo)致有效血容量減少，加重休克。 近年來(lái)，失血性休克合并顱腦外傷早期的液體治療和容量管理越來(lái)越受重視，小容量高滲鹽溶液及

2、其復(fù)合溶液復(fù)蘇失血性休克的作用已經(jīng)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)，并在臨床上有良好的治療作用。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，不少學(xué)者發(fā)現(xiàn)高滲鹽溶液有降低顱內(nèi)壓的作用，但在臨床上尚未得到確切證據(jù)。既往文獻(xiàn)中氯化鈉的濃度大多高于7.5％，對(duì)濃度低于7.5％的高滲鹽的研究鮮有報(bào)導(dǎo)；且文獻(xiàn)中多為單純高滲氯化鈉溶液，對(duì)添加了膠體的高滲鹽復(fù)合液對(duì)顱內(nèi)高壓合并休克的作用報(bào)道也較少。 本實(shí)驗(yàn)主要觀察高滲氯化鈉羥乙基淀粉注射液(hypertonicsodiumchlori

3、dehydroxyethylstarc40injection，HSH)復(fù)蘇休克降低顱內(nèi)壓作用，通過(guò)檢測(cè)腦組織丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)活力，探討HSH對(duì)腦組織缺血/再灌注損傷主要環(huán)節(jié)的影響，同時(shí)觀察腦組織相應(yīng)形態(tài)學(xué)的改變，以評(píng)估HSH在腦保護(hù)方面的應(yīng)用價(jià)值。 材料與方法： 1、動(dòng)物與分組健康雜種犬30只，雌雄不拘，體重10kg～2

4、0kg，由南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為羥乙基淀粉溶液組(HES組)，乳酸鹽林格液組(RL組)，7.5％氯化鈉溶液組(HS組)和高滲氯化鈉羥乙基淀粉注射液組(HSH組)，其中HSH組按劑量不同分為HSH4組、HSH8組和HSH12組。每組5只動(dòng)物。 2、動(dòng)物模型的建立及復(fù)蘇外周靜脈穿刺置管，靜注3％戊巴比妥鈉溶液(1ml/kg)誘導(dǎo)麻醉。麻醉平穩(wěn)后仰臥固定于操作臺(tái)上，經(jīng)口插入9號(hào)氣管導(dǎo)管，連接麻醉機(jī)，固定，調(diào)

5、節(jié)呼吸參數(shù)(呼吸頻率15/min～30/min，潮氣量250ml～430ml)使ETCO2維持于(32～37)mmHg。靜脈持續(xù)泵入維庫(kù)溴銨(0.08mg·kg-1·h-1)、吸入1％異氟烷和純氧維持麻醉。行右頸靜脈切開(kāi)，插入18G靜脈導(dǎo)管，連接監(jiān)測(cè)儀，監(jiān)測(cè)中心靜脈壓(CVP)。左股動(dòng)脈切開(kāi)，插入20G肝素化套管，監(jiān)測(cè)動(dòng)脈血壓。犬頭頂部去毛，行皮膚正中縱行切口切開(kāi)頭皮，顯露頂骨。于左頂骨鉆孔，直徑6mm～10mm，將可注水球囊置入并送至

6、硬膜外腔，固定球囊，縫合頭皮。右側(cè)頂骨鉆孔作腦室插管，腦脊液充滿塑料管后固定并接L型測(cè)壓管測(cè)腦室內(nèi)壓，調(diào)節(jié)零點(diǎn)與左外耳道平行。兩側(cè)顱骨鉆孔缺損均用骨蠟封閉，保證測(cè)壓的可靠性。向可注水球囊內(nèi)注水，使腦室內(nèi)壓比基礎(chǔ)壓力升高10mmHg并維持。右股動(dòng)脈穿刺置管，15min內(nèi)勻速放血，使MAP降低到40mmHg，并調(diào)整失血量使血壓維持此水平，持續(xù)60min完成急性顱內(nèi)高壓伴失血性休克模型制作，隨后進(jìn)行復(fù)蘇。HSH4組按4ml/kg，HSH8組按

7、8ml/kg，HSH12組按12ml/kg，HES組按等倍失血量，RL組按三倍失血量，HS組按6ml/kg輸入，所有液體均于20min內(nèi)輸完。于復(fù)蘇4h開(kāi)顱取顳葉全層腦組織，一部分用于測(cè)定MDA含量及SOD活力，另一部分用于形態(tài)學(xué)研究。 3、觀察指標(biāo) 3.1復(fù)蘇過(guò)程連續(xù)監(jiān)測(cè)MAP、CVP、HR、ICP。 3.2分別于實(shí)驗(yàn)前(T1)、造模后(T2)、復(fù)蘇后20min(T3)、復(fù)蘇后40min(T4)、復(fù)蘇后1h(T

8、5)、復(fù)蘇后2h(T6)、復(fù)蘇后3h(T7)、復(fù)蘇后4h(T8)共8個(gè)時(shí)點(diǎn)記錄數(shù)據(jù)：MAP、ICP。 3.3MDA含量及SOD活力測(cè)定：于復(fù)蘇4h打開(kāi)顱骨，在顳葉切取一約1cm3的腦組織塊，用于測(cè)定MDA含量及SOD活力。MDA含量測(cè)定采用硫代巴比妥酸法，SOD活力測(cè)定采用黃嘌呤氧化酶法。試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供，測(cè)定方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)。 3.4病理組織學(xué)研究：腦組織置于4％甲醛溶液中固定24h，乙醇梯度脫水

9、，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，封片后顯微鏡下觀察及攝片。 3.5腦組織超微結(jié)構(gòu)檢查：取大腦皮層修成1mm3的小塊，常規(guī)方法制備標(biāo)本后行透射電鏡檢查。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，先行方差齊性檢驗(yàn)，每組動(dòng)物平均體重，球囊注水量，放血量，基礎(chǔ)顱內(nèi)壓，注水后顱內(nèi)壓及各組MDA、SOD等指標(biāo)采用單因素方差分析進(jìn)行處理，各個(gè)時(shí)點(diǎn)的MAP、ICP組內(nèi)比較、組間比較、兩兩比較和多重比較采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分

10、析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)的計(jì)算采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件。 結(jié)果： 1、動(dòng)物體重、復(fù)制急性顱內(nèi)高壓伴失血性休克模型的球囊注水量、放血量、基礎(chǔ)顱內(nèi)壓以及注水后顱內(nèi)壓各組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 2、各組復(fù)蘇前后MAP、ICP變化造模前及復(fù)蘇前各組動(dòng)物MAP相似，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。復(fù)蘇后各組液體均能有效提高M(jìn)AP(與復(fù)蘇前比較F=133.096，P<0.001)，組間

11、差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但各組反應(yīng)不同。HSH提升血壓速度最快，在復(fù)蘇20min時(shí)就能恢復(fù)到初始水平。HS組在復(fù)蘇2h后血壓開(kāi)始下降，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)降至休克水平，其余各組血壓均能維持至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，組間無(wú)顯著差異(P>0.05)；時(shí)間與復(fù)蘇液體之間存在交互效應(yīng)(F=2.727，P=0.001)。 復(fù)蘇前各組動(dòng)物ICP相似，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。復(fù)蘇后各組ICP變化有顯著差異(F=133.096，P<0.001)：H

12、S組、HSH4組、HSH8組和HSH12組的ICP迅速降低，但HSH4組維持時(shí)間短，2h后緩慢上升。HS組ICP于復(fù)蘇40min降至最低值后逐漸上升，但至復(fù)蘇后4h仍低于基礎(chǔ)值。HSH8組1h后下降至最低值，接近基礎(chǔ)值水平，并維持4h。組間對(duì)ICP影響有顯著差異(F=62.678，P<0.001)，從各時(shí)間點(diǎn)看，HSH8、HSH12與HS組降低ICP差異無(wú)顯著性(P>0.05)，均強(qiáng)于HSH4組(P<0.01)；時(shí)間和復(fù)蘇液體之間存在交

13、互效應(yīng)(F=48.592，P<0.001)。復(fù)蘇后RL組和HES組ICP都呈上升趨勢(shì)。 3、各組腦組織MDA含量、SOD活力復(fù)蘇4h，HES組、HS組、HSH組腦組織的MDA含量均較RL組明顯降低，SOD活力明顯升高。其中HSH8組及HSH12組改變較其他組明顯，與HS組、RL組和HES組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 4、腦組織病理學(xué)檢查顯微鏡下，HS組神經(jīng)元細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞體積縮小，核深染，細(xì)胞與周圍組織間隙增大

14、。HES組及RL組均顯示腦皮質(zhì)水腫，神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞嚴(yán)重水腫，空泡變性，細(xì)胞核溶解消失，小血管擴(kuò)張、滲出，局部組織溶解。HSH4組腦組織結(jié)構(gòu)的破壞改善，表現(xiàn)為水腫減輕，僅少量神經(jīng)元輕度水腫，滲出減少，且無(wú)壞死灶發(fā)現(xiàn)。HSH8組腦組織結(jié)構(gòu)的破壞進(jìn)一步減少，水腫進(jìn)一步減輕，神經(jīng)元無(wú)明顯水腫，軸突形態(tài)清晰，無(wú)明顯滲出及壞死灶。HSH12組腦組織結(jié)構(gòu)變化與HSH8組接近，無(wú)明顯水腫，神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)基本正常，小血管無(wú)充血，無(wú)壞死灶發(fā)現(xiàn)。

15、 5、大腦皮層超微結(jié)構(gòu)檢查HES組：少量神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)不完整，細(xì)胞核腫脹明顯，染色質(zhì)分布稀疏；可見(jiàn)線粒體腫脹及脫顆?，F(xiàn)象，高爾基體腫脹明顯。 HS組：部分神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)不完整，細(xì)胞周圍有較大間隙，染色質(zhì)邊集較明顯；線粒體數(shù)量減少，胞漿內(nèi)可見(jiàn)空泡化；毛細(xì)血管周圍間隙明顯。 RL組：電子密度降低，神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞腫脹明顯，部分神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞包膜破裂，細(xì)胞器消失。細(xì)胞核明顯腫脹，線粒體腫脹，嵴消失，并有脫

16、顆?，F(xiàn)象；高爾基體腫脹，數(shù)量減少。 HSH組：HSH4組的神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)基本完整，細(xì)胞核清晰可見(jiàn)；線粒體輕度腫脹，排列規(guī)則，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)正常；毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)基本正常。HSH8組及HSH12組神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)基本完整，胞核清晰，核仁明顯；可見(jiàn)較為豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體；線粒體排列規(guī)則；毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)正常。 結(jié)論： 1、高滲氯化鈉羥乙基淀粉注射液可有效復(fù)蘇犬急性失血性休克。 2、高滲氯化鈉羥乙基淀粉