肝內(nèi)膽管結(jié)石與Apo AⅠ-CⅢ-AⅣ基因Pst I位點(diǎn)多態(tài)性的關(guān)系研究.pdf

1、目的:分析中國(guó)臺(tái)州地區(qū)人群載脂蛋白AⅠ-CⅢ-AⅣ基因簇(ApolipoproteinAⅠ-CⅢ-AⅣ，ApoAⅠ-CⅢ-AⅣ)的PstⅠ酶切位點(diǎn)的多態(tài)性。分析中國(guó)臺(tái)州地區(qū)Apo AⅠ-CⅢ-AⅣ基因的的PstⅠ酶切位點(diǎn)的各基因型及等位基因頻率與肝內(nèi)膽管結(jié)石易感性(the happening of hepatolithiasis)的關(guān)系。探討Apo AⅠ-CⅢ-AⅣ基因的PstⅠ酶切位點(diǎn)的多態(tài)性參與肝內(nèi)膽管結(jié)石發(fā)病的機(jī)制。探索ApoAⅠ

2、-CⅢ-AⅣ基因的的PstⅠ酶切位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)于肝內(nèi)膽管結(jié)石的診斷和治療的意義。
　　 方法:選取2006年10月到2010年10月期間在溫州醫(yī)學(xué)院附屬臺(tái)州醫(yī)院住院并行肝臟部分切除術(shù)的患者64例，所有64例患者均經(jīng)術(shù)后病理診斷確診為肝內(nèi)膽管結(jié)石;另選取2007年1月到2009年1月期間在浙江臺(tái)州醫(yī)院健康管理中心體檢的健康志愿者130例，所有志愿者均排除肝膽系統(tǒng)疾病。以上所有研究對(duì)象均為臺(tái)州漢族人群，且相互間無(wú)親緣關(guān)系。所有標(biāo)本均通

3、過(guò)知情同意下取得，且研究方案經(jīng)得醫(yī)院認(rèn)可。
　　 用SPSS軟件比較實(shí)驗(yàn)組64例和對(duì)照組120例研究對(duì)象之間的性別和年齡構(gòu)成情況，采用LSD-t檢驗(yàn)比較兩組研究對(duì)象之間的年齡差異，采用卡方檢驗(yàn)(x2)比較兩組研究對(duì)象之間的性別構(gòu)成差異。
　　 收集實(shí)驗(yàn)組研究對(duì)象的病變肝臟組織，集中保存于-80℃，液氮研磨后采用組織DNA提取試劑盒提取肝組織全基因組DNA;收集對(duì)照組研究對(duì)象外周血，采用含EDTA-K2抗凝劑的采血管，用血

4、液DNA提取試劑盒提取外周血白細(xì)胞全基因組DNA。
　　 設(shè)計(jì)針對(duì)目的基因片段的上下游引物并由生物公司合成，以上述所提得DNA為模板行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)，反應(yīng)產(chǎn)物行1.5％瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證片段大小及其特異性;另取一部分PCR產(chǎn)物做PstⅠ內(nèi)切酶酶切，酶切產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)分析結(jié)果判斷各標(biāo)本該位點(diǎn)的基因型。
　　 采用x2檢驗(yàn)對(duì)兩組研究對(duì)象的基因型進(jìn)行Hardy-Weinbe

5、rg平衡檢驗(yàn)，同時(shí)用x2檢驗(yàn)對(duì)兩組研究對(duì)象的基因型及等位基因頻率進(jìn)行比較，分析是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果:
　　 1.針對(duì)研究對(duì)象的臨床資料分析顯示實(shí)驗(yàn)組64例肝內(nèi)膽管結(jié)石患者和對(duì)照組130例正常體檢者的性別、年齡等肝內(nèi)膽管結(jié)石的可能影響因素間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.實(shí)驗(yàn)組64例患肝內(nèi)膽管結(jié)石且無(wú)膽囊結(jié)石者病變肝臟組織標(biāo)本及對(duì)照組130例正常體檢者外周血均成功抽提得DNA;實(shí)驗(yàn)組DNA濃度為230.

6、9±86.0ng/ul，對(duì)照組DNA濃度為234.4±92.2 ng/ul，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;實(shí)驗(yàn)組DNA吸光度比值A(chǔ)260/A280為1.71±0.172，對(duì)照組DNA吸光度比值A(chǔ)260/A280為1.75±0.185，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.實(shí)驗(yàn)組64例肝內(nèi)膽管結(jié)石患者病變肝臟組織標(biāo)本應(yīng)用PCR技術(shù)和瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)檢測(cè)Apo AⅠ-CⅢ-AⅣ基因目的片段，檢出64例，檢測(cè)陽(yáng)性率為100％(64/64

7、)。對(duì)照組120例正常體檢者外周血標(biāo)本應(yīng)用PCR技術(shù)和瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)檢測(cè)ApoAⅠ-CⅢ-AⅣ基因目的片段，檢出130例，檢測(cè)陽(yáng)性率為100％(130/130)。
　　 4.研究人群中存在A(yíng)po AⅠ-CⅢ-AⅣ基因PstⅠ酶切位點(diǎn)多態(tài)性，酶切結(jié)果顯示其基因型分別為AA、AC、CC，實(shí)驗(yàn)組64例肝內(nèi)膽管結(jié)石患者和對(duì)照組130例正常體檢者各基因型頻率均符合遺傳學(xué)的Hardy-Weinberg平衡。
　　 5.肝內(nèi)膽管結(jié)

8、石組中AA、AC、CC基因型頻率分別為95.3％、4.7％、0.0％，正常對(duì)照組中AA、AC、CC基因型頻率分別為90.0％、10.0％、0.0％。肝內(nèi)膽管結(jié)石組和正常對(duì)照組各基因型頻率的比較（x2=1.599，P=0.206）和等位基因頻率的比較（x2=1.531，P=0.216）差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:Apo AⅠ-CⅢ-AⅣ基因PstⅠ位點(diǎn)多態(tài)性可能與肝內(nèi)膽管結(jié)石的易感性不相關(guān);兩者之間的更確切關(guān)系有待擴(kuò)大研究區(qū)