地衣芽孢桿菌ZJU12所產細菌素的分離純化及其理化性質和基因克隆的研究.pdf

1、地衣芽抱桿菌ZJU12從土壤中分離出來，能產生細菌素，對多種革蘭氏陽性細菌和植物病原真菌有拮抗作用，但是對除水稻白葉枯病原菌以外的革蘭氏陰性細菌沒有拮抗作用。地衣芽抱桿菌ZJU12所產細菌素對蛋白酶K和胰蛋白酶敏感。經100攝氏度30分鐘后仍具有拮抗活性，121攝氏度15分鐘后完全失活。地衣芽抱桿菌ZJU12的去菌液在pH 2--9內具有拮抗活性，其中最適pH值在6.5左右。細菌培養(yǎng)去菌液經65％硫酸按沉錠、DEAE-52離子交換色譜、

2、Superdex 75凝膠過濾色譜，并經過Triclne-SDS-PAGE和HPLG檢測純度，純化得到一種分子量在3.5KDa左右的細菌素。利用LC-MS/NH4S方法得到序列分別為MHENVEEYLPMN, QPATEYLYNTDY, LLPLLUDTY的三段肚鏈。經查詢，沒有發(fā)現與己知序列的同源性(NCSI)。純化的抗菌物質也進行了N端測序，但沒有得到氨基酸序列。地衣芽抱桿菌ZJU12的拮抗粗提物最高在0.8g/20g的劑量時對實驗

3、小鼠沒有急性毒性。 通過測定乳酸鏈球菌素(sin)和地衣芽抱桿菌ZJU12的去菌液((cFSb)對黃色微球菌、金黃色葡萄球菌和蠟樣芽胞桿菌的抑菌作用，發(fā)現黃色微球菌比其他兩種指示菌對乳酸鏈球菌素和去菌液更加敏感，表現出更低的最小抑菌濃度值。用棋盤稀釋法和殺菌時間法測定發(fā)現nisin和cFSb具有協(xié)同作用。從部分抑菌濃度指數來看，naisin和CFSb的聯合對蠟樣芽胞桿菌具有最顯著的協(xié)同抑菌作用。naisin和CFSb在30分鐘內

4、就表現出殺菌作用，而它們的協(xié)同殺菌作用在4小時后才表現出來。 用Superdex 75凝膠過濾色譜的第二峰尖收集液免疫新西蘭大白兔獲得多克隆抗體。用斑點酶聯免疫吸附試驗法和目標抗原的拮抗作用法對抗原抗體反應的敏感性進行了分析，結果表明發(fā)現拮抗作用法比斑點ELISA具有更好的靈敏性。拮抗作用法只需抗原1OOAU/ml,抗體1: 8000就能檢測到抗體抗原反應，而斑點ELISA需抗原200AU/ml.抗體1:2000。經檢測地衣芽抱