應(yīng)激刺激后早期藥物干預(yù)預(yù)防大鼠創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙（post-traumatic stress disorder,PTSD）是指突發(fā)性、威脅性或?yàn)?zāi)難性生活事件發(fā)生后所出現(xiàn)的個(gè)體延遲和長期持續(xù)存在的精神或心理障礙，主要表現(xiàn)為病理性再度體驗(yàn)創(chuàng)傷、持續(xù)性警覺性增高和回避。因PTSD一般都呈現(xiàn)慢性病程、癥狀多樣和高復(fù)發(fā)率，使得其治療面對(duì)許多困難，甚至有些人會(huì)伴隨終生。
　　PTSD的臨床藥物治療主要以選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑（SSRIs）為主，此外還有抗抑郁藥、典型和非

2、典型抗精神藥等，關(guān)于藥物治療PTSD已有大量文獻(xiàn)報(bào)道。迄今為止，如何采用藥物有效預(yù)防PTSD的研究卻少有文獻(xiàn)報(bào)道，開展藥物預(yù)防PTSD的研究對(duì)PTSD的防治具有重要意義。
　　本課題以大鼠單一延長結(jié)合足底電擊刺激（SPS&S）模型為基礎(chǔ)，在應(yīng)激后早期分別給予大鼠不同劑量苯二氮卓類藥物阿普唑侖，三環(huán)類抗抑郁藥米帕明、抗抑郁藥米氮平、抗癲癇藥卡馬西平、吩噻嗪類抗精神藥氟哌啶醇和β1腎上腺受體阻滯藥美托洛爾，運(yùn)用電擊箱、高架十字迷宮（E

3、levated plus maze,EPM）、曠場(chǎng)（Open-field，OF）實(shí)驗(yàn)、Morris水迷宮(Morris water maze,MWM）等行為學(xué)測(cè)試方法，觀察大鼠的條件恐懼反應(yīng)、探究能力、焦慮水平、學(xué)習(xí)和記憶能力的改變，探討在應(yīng)激后早期預(yù)防性給予上述不同劑量藥物預(yù)防PTSD發(fā)生的可能性，篩選何種藥物能夠預(yù)防PTSD的發(fā)生，以及確定預(yù)防用藥的有效劑量范圍和最佳用藥持續(xù)時(shí)間，為臨床預(yù)防PTSD的發(fā)生及用藥提供科學(xué)依據(jù)。

4、　　目的：
　　1.評(píng)價(jià)在創(chuàng)傷性應(yīng)激刺激后早期預(yù)防性給予不同類別、劑量的藥物對(duì)大鼠的條件恐懼、探究能力、焦慮和學(xué)習(xí)記憶能力的影響，篩選出預(yù)防PTSD的有效藥物。
　　2.探討藥物預(yù)防PTSD的有效劑量范圍和最佳用藥持續(xù)時(shí)間。
　　方法：
　　1.PTSD動(dòng)物模型——SPS&S模型的建立
　　由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供八周齡SD大鼠16只，每籠4只，分籠飼養(yǎng)。光亮/黑暗周期為12/12h，環(huán)境溫度為（22

5、-25）℃，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后大鼠被隨機(jī)分為：空白對(duì)照組和SPS&S組。將SPS&S組大鼠用高強(qiáng)度聚乙烯膜自頭部至尾部完全包裹，并用膠帶束縛，鼻部附近留3～5個(gè)透氣孔，連續(xù)束縛2h（期間大鼠頭、爪被固定不能移動(dòng)）。2h后解除束縛，繼之強(qiáng)迫大鼠游泳20min。大鼠休息15min后，乙醚麻醉使其喪失意識(shí)，待恢復(fù)意識(shí)后再放入電擊箱中接受不可避免性足底電擊，然后將大鼠放回飼養(yǎng)籠中不受打擾飼養(yǎng)2周。第14d在電擊箱中測(cè)試大鼠的條件恐懼水平，第15d

6、在OF和EPM中測(cè)試兩組大鼠的探究行為、焦慮水平，第16-21d在MWM中測(cè)試大鼠的空間認(rèn)知能力，評(píng)價(jià)SPS&S應(yīng)激模型的有效性。
　　2.SPS&S應(yīng)激后早期不同劑量給藥方案
　　八周齡SD大鼠，隨機(jī)分為空白對(duì)照組，SPS&S組，單純給藥組（給中劑量藥物，不應(yīng)激），應(yīng)激后小劑量、中劑量和大劑量給藥組，每組各8只。依上述應(yīng)激模型制備方法對(duì)大鼠實(shí)施應(yīng)激刺激，應(yīng)激刺激后當(dāng)天采用自由飼水方式分別給大鼠飼喂不同劑量阿普唑侖（0.06

7、mg/kg/d，0.125mg/kg/d)，米氮平(0.375mg/kg/d,0.75mg/kg/d,1.5mg/kg/d)，卡馬西平(9.75mg/kg/d,19.5mg/kg/d,39mg/kg/d)，米帕明1.95mg/kg/d,3.9mg/kg/d,7.8mg/kg/d)，美托洛爾（1.56mg/kg/d,3.125mg/kg/d,6.25mg/kg/d)，氟哌啶醇0.013mg/kg/d,0.025mg/kg/d,0.05mg

8、/kg/d)，上述藥物再結(jié)合大鼠體重計(jì)算出每只大鼠每天用藥量后，將其溶于大鼠飼水中連續(xù)飼喂連續(xù)飼喂14d。單純給藥組僅連續(xù)飼喂中劑量上述藥物14d，不給于應(yīng)激刺激，應(yīng)激對(duì)照組僅實(shí)施應(yīng)激刺激，自由飲用不含藥物的水。于給藥后第14d觀察大鼠的條件恐懼水平，第15d在OF和EPM中分別評(píng)價(jià)兩組大鼠的探究行為和焦慮水平；第16-21d在MWM中評(píng)價(jià)大鼠的空間認(rèn)知能力。
　　3.SPS&S應(yīng)激后早期不同持續(xù)時(shí)間給藥方案
　　八周齡的S

9、D大鼠，隨機(jī)分為空白對(duì)照組，SPS&S組，單純給藥組（米氮平0.75mg/kg/d，米帕明3.9mg/kg/d，不應(yīng)激），米氮平3d組（應(yīng)激，米氮平0.75mg/kg/d連續(xù)3d），米氮平7d組（應(yīng)激，米氮平0.75mg/kg/d連續(xù)7d），米帕明3d組（應(yīng)激，米氮平0.75mg/kg/d連續(xù)3d），米帕明7d組（應(yīng)激，米氮平0.75mg/kg/d連續(xù)7d），每組各8只。依SPS&S應(yīng)激模型制備方法對(duì)大鼠實(shí)施應(yīng)激刺激，應(yīng)激刺激后當(dāng)天采用

10、自由飼水方式給大鼠飼喂劑量米氮平0.75mg/kg/d，米帕明3.9mg/kg/d，上述藥物再結(jié)合大鼠體重計(jì)算出每只大鼠每天用藥量后，將其溶于大鼠飼水中連續(xù)飼喂3、7d。單純給藥組僅飼喂中劑量上述藥物，連續(xù)7d，不給于應(yīng)激刺激，應(yīng)激對(duì)照組僅實(shí)施應(yīng)激刺激，自由飲用不含藥物的水。第3、7d在OF中分別評(píng)價(jià)大鼠的探究行為，第4、8d在EPM中分別評(píng)價(jià)大鼠的焦慮水平，第5-10、9-14d在MWM中分別評(píng)價(jià)大鼠的空間認(rèn)知能力。
　　結(jié)果：

11、
　　1.大鼠經(jīng)SPS&S后對(duì)其條件恐懼、焦慮水平、探究行為及認(rèn)知能力的影響。
　　在MWM實(shí)驗(yàn)中，SPS&S組大鼠的上臺(tái)潛伏期相比空白對(duì)照組明顯增加；靶象限穿臺(tái)次數(shù)相比空白對(duì)照組明顯減少（P<0.05），說明SPS&S應(yīng)激可以顯著損傷大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
　　在高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中，SPS&S組大鼠5min內(nèi)的開臂進(jìn)入次數(shù)百分比和開臂停留時(shí)間百分比相比空白對(duì)照組明顯減少（P<0.05），說明SPS&S應(yīng)激可以顯著增高大

12、鼠的焦慮水平。
　　在電擊箱中，SPS&S組大鼠3min內(nèi)的僵滯時(shí)間相比空白對(duì)照組明顯增加（P<0.05），說明SPS&S應(yīng)激可以顯著增加大鼠條件恐懼。
　　在曠場(chǎng)試驗(yàn)中，SPS&S組大鼠15min內(nèi)的水平活動(dòng)距離相比空白對(duì)照組明顯縮短（P<0.05），說明SPS&S應(yīng)激可以顯著損傷大鼠的探究行為。
　　2.SPS&S后早期持續(xù)給予大鼠不同劑量苯二氮卓類藥物阿普唑侖，三環(huán)類抗抑郁藥米帕明、抗抑郁藥米氮平、抗癲癇藥卡馬西

13、平、吩噻嗪類抗精神藥氟哌啶醇和β1腎上腺受體阻滯藥美托洛爾干預(yù)預(yù)防14d后對(duì)大鼠的條件恐懼、焦慮水平、探究行為及空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響。
　　MWM實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，中劑量米氮平、美托洛爾和阿普唑侖組大鼠的穿臺(tái)次數(shù)相比SPS&S組明顯增加（P<0.05），表明在應(yīng)激后早期持續(xù)給予中劑量米氮平、美托洛爾和阿普唑侖14d后可以有效預(yù)防SPS&S大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的下降。
　　高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，中劑量米帕明、氟哌啶醇、米氮平

14、、卡馬西平和阿普唑侖組大鼠在EPM中開臂停留時(shí)間百分比較SPS&S組顯著增加（P<0.05），表明在應(yīng)激后早期持續(xù)給予中劑量米帕明、氟哌啶醇、米氮平、卡馬西平和阿普唑侖14d后可以有效改善SPS&S大鼠的焦慮水平。
　　條件恐懼反應(yīng)結(jié)果顯示，中劑量美托洛爾、米帕明、米氮平、氟哌啶醇和卡馬西平組大鼠在電擊箱中的僵滯時(shí)間相比SPS&S組明顯減少（P<0.05），表明在應(yīng)激后早期連續(xù)給予中劑量美托洛爾、米帕明、米氮平、氟哌啶醇和卡馬西平

15、14d后，可以有效改善SPS&S大鼠的條件恐懼。
　　曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，中劑量米帕明、氟哌啶醇、卡馬西平、米氮平、美托洛爾和阿普唑侖均能夠顯著增加大鼠在曠場(chǎng)中的水平活動(dòng)距離，說明在應(yīng)激后早期連續(xù)給予中劑量米帕明、氟哌啶醇、卡馬西平、米氮平、美托洛爾和阿普唑侖14d后，可以有效改善SPS&S對(duì)大鼠探究行為的抑制。
　　3.SPS&S應(yīng)激后早期分別連續(xù)給予中劑量米氮平和米帕明3、7d后對(duì)大鼠焦慮水平、探究行為及空間學(xué)習(xí)記憶能力的

16、影響。
　　MWM實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，中劑量米帕明連續(xù)用藥7d能夠顯著增加SPS&S大鼠在靶象限的穿臺(tái)次數(shù)，表明在應(yīng)激后早期持續(xù)給予中劑量米帕明7d可以有效預(yù)防SPS&S大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的下降。中劑量米帕明連續(xù)用藥3d，中劑量米氮平分別連續(xù)用藥3d、7d后對(duì)SPS&S所致大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的下降無改善作用。
　　高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，中劑量米帕明分別連續(xù)用藥3d、7d，中劑量米氮平連續(xù)用藥7d，均能夠顯著增加SPS&S大

17、鼠在EPM開臂中停留時(shí)間百分比，表明在應(yīng)激后早期持續(xù)給予米帕明和米氮平可以有效改善SPS&S大鼠焦慮。中劑量米氮平連續(xù)用藥3d，對(duì)SPS&S大鼠焦慮無改善作用。
　　曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，中劑量米氮平、米帕明分別連續(xù)用藥3d、7d，均能夠顯著增加SPS&S大鼠在曠場(chǎng)中的水平活動(dòng)距離，表明在應(yīng)激后早期分別連續(xù)給予米帕明和米氮平3d、7d后均可有效改善SPS&S大鼠的探究行為抑制，最短有效用藥時(shí)間為3d。
　　結(jié)論：
　　1.

18、SPS&S應(yīng)激后早期給予亞治療劑量米氮平、米帕明，能夠顯著改善SPS&S大鼠的條件恐懼、焦慮水平、探究行為抑制及空間學(xué)習(xí)記憶能力損傷。卡馬西平、氟哌啶醇、美托洛爾和阿普唑侖對(duì)SPS&S大鼠的條件恐懼、焦慮、探究行為抑制及空間學(xué)習(xí)記憶能力損害有改善作用，但不及米氮平和米帕明。
　　2.SPS&S應(yīng)激后早期分別持續(xù)給予亞治療劑量米氮平、米帕明3d可以改善SPS&S大鼠的條件恐懼、焦慮水平以及探究行為抑制，持續(xù)給予亞治療劑量米帕明7d可